北冬虫夏草液体培养条件的优化与诱变育种

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北冬虫夏草(Cordyceps militaris( L.)Link),属于麦角菌科虫草属,与冬虫夏草同属,异种,它生长在中山区或浅山区,能够在多种昆虫的蛹上寄生。北冬虫夏草对于生长环境的要求较低,液体发酵可形成菌丝体,人工大规模固体培养可获得子座,药用价值与驰名中外的冬虫夏草相似[1]。北冬虫夏草的成分如虫草多糖和虫草酸,与天然冬虫夏草的含量相当,有些成分的含量甚至超过天然冬虫夏草,如虫草素的含量是天然冬虫夏草的35倍[2]。其有效活性成分虫草多糖(CMPS)被认为是非特异性免疫调节剂,可激活肌体的免疫活性细胞,为我国名贵的药用真菌。但北冬虫夏草野生资源少,极大的限制了它的应用,而人工培养可弥补此点,特别是液体发酵可使北冬虫夏草的应用成为可能。目前人工栽培获得成功并开发了系列产品,为滋补保健食品、功能食品和药源开辟了新的途径,随着科技进步,其栽培、应用前景十分广阔。目前生产中采用的菌种其虫草多糖和虫草酸的含量还有待提高。因此,本研究对北冬虫夏草子实体进行组织分离,制备菌种,以此作为出发菌株,利用紫外线、微波及其二者结合分别对出发菌株进行诱变的研究,探讨了处理剂量、时间等因素对诱变结果的影响。经三种诱变方法的诱变,并以其多糖含量和生物量为试验指标,进行测量。同时对其进行遗传稳定性试验,结果表明该菌株的多糖生产能力比较稳定,经2次传代,其生物性能稳定。对原菌株进行液体培养条件研究,获得了一个最佳摇瓶培养条件为:蛋白胨1.5%,蔗糖2%,KH2PO40.1%,MgSO40.1%,温度20℃,pH7,转速为170r/min,发酵时间5d。,在此条件下对对照菌株和诱变菌株进行了培养,对照菌株虫草多糖含量为28.9692mg,诱变菌株虫草多糖含量为30.4243 mg,诱变菌株比对照菌株高5%。同时对对照菌株和诱变菌株进行了固体培养,对其虫草多糖含量进行了测定,对照菌株多糖含量为2.7955mg/g培养基,诱变菌株3.2713 mg/g培养基,诱变菌株比对照菌株高17%。在此培养条件下诱变菌株多糖含量显著提高,有一定的应用价值。本研究的创新点在于:首次尝试应用北冬虫夏草菌丝体片段进行物理诱变育种,包括紫外线诱变和微波诱变,以及紫外和微波的复合诱变,结果显示,紫外和微波的复合诱变对北冬虫夏草菌丝体片段具有较好的诱变效果,该试验方法操作简单易行。
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