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目的: 探究前列腺增生组织及前列腺癌组织中细胞周期蛋白GTSE1的表达水平,结合收集归纳的患者临床指标和生存现状结果,通过专业软件研究其中关系。探讨细胞周期蛋白GTSE1在前列腺癌细胞及前列腺增生细胞中表达水平,探索肿瘤细胞在其影响下的变化。 方法: 1.收集同时期前列腺增生病人及前列腺癌病人的临床病理信息和病理标本,免疫组织化学染色检测GTSE1蛋白在正常组织和癌组织的表达差异水平。通过统计学方法,采用专业分析软件,分析细胞周期蛋白GTSE1与所收集归纳整理的患者临床病理信息的逻辑关系及意义,进一步综合分析其对患者生存的影响。 2.培养人正常前列腺上皮细胞系与前列腺癌细胞系,包括一种正常的前列腺细胞RWPE-1、四种肿瘤细胞系C4-2、LNCaP、PC-3及DU145细胞,通过应用RT-qPCR(实时定量聚合酶链反应技术)和Western Blot(蛋白质印记法),在转录和翻译两种水平,分别检测细胞内GTSE1 RNA和蛋白表达水平,统计学分析。 3.选择高表达细胞周期蛋白GTSE1的前列腺癌细胞系,通过RNA干扰技术敲低其表达水平,设置对照及阴性对照,应用Western Blot检测GTSE1蛋白表达是否改变,进行细胞生物学行为相关实验,包括细胞增殖能力实验(MTT实验、CCK-8实验),细胞迁移能力分析检测(划痕实验),细胞侵袭能力分析检测(Transwell侵袭实验),通过软件进行统计分析。 4.选择低表达细胞周期蛋白GTSE1的前列腺癌细胞系,通过转染GTSE1高表达质粒增加其表达水平,设置对照及阴性对照,应用Western Blot检测GTSE1蛋白表达水平变化,进行细胞生物学行为相关实验,包括细胞增殖能力实验(MTT实验、CCK-8实验),细胞迁移能力分析检测(划痕实验),细胞侵袭能力分析检测(Transwell侵袭实验)。 结果: 1.免疫组织化学结果显示:细胞周期蛋白GTSE1翻译水平,即蛋白表达量在正常组织和癌组织表达具有显著差异,与前列腺增生组织相比,前列腺癌组织中细胞周期蛋白GTSE1表达的含量明显增高(P<0.05)。 2.临床病理资料相关性:分析资料显示为前列腺癌组织中细胞周期蛋白GTSE1表达水平显著提升的患者,其血清前列腺癌特异性抗原(PSA)表达值、Gleason评分均较提升不明显患者提高,多存在淋巴结转移瘤(P<0.05)。患者预后不良(χ2=21.361,P<0.005)。 3.在RNA和蛋白两种水平检测,细胞周期蛋白GTSE1在前列腺癌细胞中表达量高于正常前列腺上皮细胞系(P<0.05),并且在GTSE1蛋白在PC3、DU145癌细胞系中的表达高于C4-2、LNCaP癌细胞系(P<0.05)。 4.选择细胞周期蛋白GTSE1表达水平较高的PC3细胞系,分为control组、NC control组及GTSE1-siRNA组,Western blot实验证明,与对照组的表达量相比,通过RNA干扰技术,借助siRNA可显著降低将PC3细胞GTSE1表达水平。敲低细胞周期蛋白GTSE1表达水平,通过潜在机制抑制细胞的恶性生物学行为,显著抑制细胞增殖(P<0.05),减弱细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。 5.选择细胞周期蛋白GTSE1表达水平较低的LNCaP细胞系,分为control组、NC control组及GTSE1-high组,Western blot实验结果显示,与对照组目的基因表达量相比,高表达质粒可显著增加翻译水平LNCaP细胞内GTSE1蛋白的表达水平。提高细胞周期蛋白GTSE1显著促进细胞增殖(P<0.05),加强细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。 结论: 前列腺癌组织细胞周期蛋白GTSE1表达水平高于前列腺增生组织,二者之间差异具有统计学的意义,而统计分析也显示增高的表达GTSE1蛋白的前列腺癌患者病理分级、分期较高,影响患者生存。同时GTSE1蛋白能够促进肿瘤细胞增殖,提高其迁移能力和侵袭能力,提示其可能为前列腺癌潜在生物学标记物和治疗靶点。