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第一部分胰腺癌Panc-1细胞中XIAP和Survivin的表达及其与化疗抵抗的相关性目的探讨胰腺癌细胞系Panc-1中XIAP和Survivin的表达及其与Gem化疗耐药性的相关性。方法体外培养人胰腺癌细胞系Panc-1、Sw1990、和Miapaca-2,实时定量RT-PCR和Western Blot检测XIAP和Survivin的表达,MTT检测Gem化疗敏感性(IC50值)。运用Gem间断培养法诱导Panc-1Gem耐药细胞株,实时定量RT-PCR和Western Blot检测XIAP和Survivin的表达,MTT检测Gem化疗敏感性(IC50值),并进行相关性分析。结果(1)3种胰腺癌细胞株中均有XIAP和Survivin表达,在化疗抵抗性最强的Panc-1中表达均最高,在化疗敏感性最强的Miapaca-2中表达均最低,在化疗敏感性居中的SW1990细胞中表达均居中。(2) Gem诱导的耐药Panc-1细胞中,耐药性显著增加(IC50值显著增高),XIAP和Survivin表达显著诱导升高,两者之间呈正相关。结论XIAP、Survivin的表达具有相关性,两者同时是胰腺癌细胞panc-1组成性的、可诱导的化疗抵抗因子。第二部分慢病毒介导RNAi抑制XIAP和Survivin表达对Panc-1细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响目的探讨在胰腺癌细胞系Panc-1中,同时抑制XIAP和Survivin的表达对细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响。方法(1)分别单独或同时运用XIAP-shRNA和Survivin-shRNA慢病毒感染胰腺癌细胞系Panc-1,建立XIAP和/或Survivin稳定抑制的细胞株。(2)实时定量RT-PCR和Western Blot分别检测相应细胞株中XIAP和Survivin的表达,细胞计数法和克隆形成实验检测细胞增殖,MTT检测Gem化疗敏感性(IC50值)。结果(1)成功建立XIAP和/或Survivin稳定抑制的细胞株Panc-1-X, Panc-1-S, Panc-1-XS。(2)同时抑制XIAP和Survivin表达显著抑制Panc-1细胞增殖能力,并增强其Gem化疗敏感性。(3) Panc-1-XS的Gem化疗敏感性显著高于Panc-1-X, Panc-1-S。结论同时抑制XIAP、Survivin表达显著抑制Panc-1细胞增殖,且较单独抑制XIAP或Survivin表达更显著增强其Gem化疗敏感性。第三部分同时抑制XIAP和Survivin表达对Panc-1细胞EMT、侵袭和迁移能力的影响及其机制初步探讨目的探讨同时抑制XIAP和Survivin的表达对Panc-1细胞EMT、侵袭和迁移能力的影响,并初步探讨其可能的机制。方法体外培养XIAP和Survivin的表达同时抑制的Panc-1-XS细胞,运用Western Blot检测E-Cadherin、Slug、PTEN及P-Akt蛋白的表达。划痕实验和Transwell侵袭实验观察Panc-1细胞侵袭能力的变化。结果(1)在Panc-1细胞中同时抑制XIAP和Survivin表达,显著升高E-Cadherin蛋白的表达,降低Slug蛋白的表达。(2)在Panc-1细胞中同时抑制XIAP和Survivin表达,显著升高PTEN蛋白的表达,降低P-Akt蛋白的表达。(3)同时抑制XIAP和Survivin表达显著减弱Panc-1的侵袭能力。结论同时稳定抑制胰腺癌细胞株Panc-1中XIAP和Survivin的表达,可能通过PTEN/PI3K/Akt途径部分逆转其EMT表型,并降低胰腺癌细胞侵袭和迁移能力。