猪瘟野毒E2基因同源性比较及在PK15细胞中增殖特性的研究

来源 :中国农业科学研究院 中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:goooooooal
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本实验以猪瘟野毒人工感染发病猪的脾脏为材料,提取细胞总RNA,根据已报道的CSFV基因组序列设计合成特异性引物,以细胞总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、套组聚合酶链式反应(nPCR)及测定技术,对流行于我国甘肃、陕西、宁夏、和广西四个省5株野毒株的主要外膜糖蛋白E2基因的核苷酸序列进行了测定,用Goldkey软件比较分析了5株毒相互之间以及它们与猪瘟兔化弱毒株(C-ST株)E2基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性,结果发现五株流行毒与C-ST株核苷酸序列的同源性在81.7%~83.1%,氨基酸同源性在87.3%~88.6%,它们之间存在着较大的差异,但五株流行毒之间核苷酸序列的同源性高达98.8%~99.3%,氨基酸同源性在96.6%~99.2%,它们之间的差异较小。同时本实验以一株猪瘟野毒株为材料,通过荧光染色技术,观察CSFV在传代细胞PK-15中分布及繁殖特征。结果发现接毒后6h,胞质中开始出现微弱荧光,到54h时荧光最强,随后荧光强度逐渐减弱,至78h,细胞轮廓不太规则,也不清楚,84h细胞中出现“空泡样”变化,至96h时,荧光微弱。HCV抗原在细胞表面很少,而主要存在于细胞内,特别是在细胞膜的某些区域荧光较强,可见到细胞核清晰的轮廓。从而说明,抗原主要存在于核膜以及内质网和高尔基体富集的区域。在细胞质中,HCV抗原分布不均匀,在某些区域形成荧光很强的小斑块。
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