乙烷基亚硝基脲(ENU)是一种人工合成的高效烷化剂,能够以较高的效率诱导DNA突变,从而获得大量的人类疾病小鼠模型,用于人类相关疾病的发生、发展机制以及基因功能的研究。本研究利用ENU诱变方法,目前获得7种可遗传的突变小鼠模型,并对其中2种角膜病小鼠模型的角膜组织病变特征进行研究:1 ENU诱变获得两种遗传性角膜病小鼠模型本研究利用ENU腹腔注射15只8-10周龄雄性野生型C57BL/6J(B6)小鼠,待其恢复生殖能力后与野生型B6雌鼠配种繁育。经过初步筛选,共获得36只异常表型小鼠(白斑、瞳孔异位、无眼、角膜混浊等)。通过遗传验证实验,目前确定了7种可遗传的突变小鼠模型。本研究将其中2种角膜病小鼠分别命名为Cod1(Corneal disease 1)、Cod2(Corneal disease 2),并展开后续工作。2Cod1、Cod2小鼠角膜HE染色分析采用HE染色法分析角膜组织发现:(1)正常小鼠角膜整体结构层次分明,上皮细胞排列整齐,上皮基部平整;角膜基质层中可见平行排列的胶原纤维,不含血管;内皮细胞明显。(2)2周龄Cod1小鼠角膜基质层底部局部胶原纤维松散,部分内皮细胞层缺失;8周龄Cod1小鼠角膜上皮表层局部出现空泡,基质层出现新生血管,部分内皮细胞层缺失。(3)2周龄Cod2小鼠角膜基质层底部胶原纤维松散;8周龄Cod2小鼠角膜上皮明显变薄,基质层底部局部胶原纤维松散,基质层出现明显新生血管。3Cod1、Cod2小鼠角膜免疫组织化学分析首先以抗CD31抗体对8周龄Cod1、Cod2小鼠角膜进行免疫组织化学分析,结果显示CD31均于Cod1、Cod2小鼠角膜基质层中表达,进一步证实了新生血管的存在。新生血管的生成往往也与角膜分化异常有关,故利用抗角蛋白Keratin 12(K12)、Keratin 14(K14)及Keratin 10(K10)对Cod1、Cod2小鼠角膜进行免疫组织化学分析,了解角膜上皮细胞分化情况。与野生型小鼠相比:(1)2周龄Cod1小鼠角膜上皮细胞K12表达较弱且局部为阴性,8周龄Cod1小鼠角膜K12表达增强;2周龄Cod2小鼠局部角膜上皮细胞K12为阴性,8周龄Cod2小鼠角膜K12阳性细胞明显减少且表达变弱。(2)2周龄及8周龄Cod1、Cod2小鼠所有角膜上皮层均表达K14且明显增强。(3)Cod1、Cod2小鼠角膜K10组化结果均为阴性,与野生型小鼠一致。结论:本研究首先采用ENU诱变获得2种遗传性角膜病小鼠模型(Cod1、Cod2),并通过HE及免疫组织化学染色方法对其角膜组织进行研究,从而分析角膜混浊发生的原因,为这2种小鼠模型的应用奠定基础,并为人类遗传性角膜病发生的原因提供参考。