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目的通过对凋亡效应分子Caspase-3及抗凋亡蛋白BcL-2在脓毒症大鼠心肌细胞表达变化的观察,以及炎症介质TNF-α与心肌细胞凋亡指数AI的相关性分析,探讨脓毒症时TNF-α在心肌细胞凋亡中的作用。并部分给予肿瘤坏死因子单克隆抗体进行干预,进一步证明TNF-α与心肌细胞凋亡指数AI的因果关系。材料方法将72只wistar雄性大鼠随机分为对照组(n=24)、实验组(n=24)、干预组(n=24),各组又分3h、12h、24h、36h 4个亚组。实验组采用盲肠结扎穿孔(CLP)法复制脓毒症模型,对照组行假手术,除不做盲肠结扎穿孔外,余同实验组,干预组于术前30min腹腔注射0.2mg/kg溶于0.9%氯化钠溶液1ml肿瘤坏死因子α单克隆抗体(anti-TNFα-mAb)。通过ELISA检测心肌组织TNF-α,TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI)、免疫印迹法检测Caspase-3及bc1-2水平的变化。结果1、病理改变光镜下正常对照组:未见明显的病理改变,心肌纤维排列规则,结构清晰。实验组大鼠随着时间的延长,心肌逐渐出现病理改变,心肌组织紊乱,血管充血出血,心肌细胞间见成堆血细胞,尤以36h最明显,心肌细胞肿胀或皱缩,胞核变形。干预组心肌组织紊乱,可见有出血点,较同时点实验组相比病理变化减轻,细胞核未见明显变化。2、ELISA结果CLP术后心肌组织TNFα呈持续升高,与对照组相比有显著差异(P<0.01),36hTNF-α水平达高峰,但24h和36h TNF-α水平无显著差异(P>0.05),干预组TNF-α水平较脓毒症组均显著下降,差别有统计学意义(P<0.01)。3、TUNEL结果CLP术后心肌细胞凋亡指数呈进行性增加,与对照组相比有显著差异(P<0.01),36h达高峰,但24h和36h相比无显著差异(P>0.05),干预组心肌细胞凋亡数较实验组均显著下降,有显著差异(P<0.01)。4、免疫印迹结果相同时点实验组和干预组大鼠心肌组织Caspase-3均高于对照组(P<0.01),且实验组Caspase-3水平均高于同时点干预组(P<0.01),相同时点实验组和干预组大鼠心肌bc1-2均低于对照组(P<0.01),干预组bc1-2水平高于实验组(P<0.01)。5、相关性分析大鼠心肌组织TNF-α与心肌细胞凋亡指数(AI)之间存在正相关。(r=0.903,P<0.001)。结论本实验采用盲肠结扎穿孔法制作脓毒症模型,在结扎术后3h大鼠即开始出现大鼠一般状态、白细胞等的改变,符合脓毒症的特点,可证明脓毒症模型复制成功。通过对caspase-3、bc1-2及TNF-α的研究发现,脓毒症的发展过程中,心肌细胞凋亡逐渐增加,凋亡指数与TNF-α成正相关,说明在心肌细胞凋亡中,TNF-α起重要作用,采用肿瘤坏死因子单克隆抗体预处理大鼠,使研究结果更具有针对性。由此,我们可以得出脓毒症时心肌细胞凋亡的发生与TNF-α密切相关,bc1-2、caspase-3及TNF-α表达的改变或许可以作为脓毒症病情改变的标志,可能利用他们对脓毒症进行干预,改善脓毒症的预后。