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研究背景和目的:严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV),感染后导致严重发热伴血小板减少综合征(SFTS),死亡率较高。目前其致病机制尚不明确,临床以对症治疗为主,药物研发进展缓慢。干扰素(interferon,IFN)介导的固有免疫应答是抵抗病原体入侵的首要防线之一。干扰素刺激基因(IFN-stimulatedgenes,ISGs)是干扰素信号通路激活后的最终效应分子,发挥抗病毒和/或免疫调节作用,干扰素诱导的四肽重复蛋白3(IFIT3)就是其中之一。IFIT3在登革病毒、水泡口炎病毒等多种病毒感染中发挥着抗病毒作用;在SFTSV感染的单核细胞中IFIT3表达显著增加。这些数据提示,IFIT3与病毒感染关系密切,但其对SFTSV的作用尚无相关报道,具体机制也有待进一步研究。本研究的目的在于研究在体外培养体系中,IFIT3对SFTSV复制的影响并初步探究其作用机制。研究方法:1.通过转染质粒或siRNA分别上调或下调A549细胞中IFIT3的表达,real-time PCR及Western Blot等方法检测IFIT3的表达及SFTSV复制情况;2.通过转染质粒或siRNA调节A549细胞中IFIT3的表达,然后感染SFTSV,再加入Ⅰ型IFN处理,real-time PCR检测SFTSV复制情况,评价IFIT3对IFN抗病毒作用的影响;Western Blot检测Janus酪氨酸激酶/信号转导转录激活因子(JAK/STAT)信号通路中STAT1的磷酸化水平,双荧光报告基因检测干扰素刺激反应元件(ISRE)的活性,real-time PCR检测ISGs的表达量,评价IFIT3对干扰素信号通路的影响;real-time PCR检测产生IFN的相关信号通路关键分子的表达。研究结果:1.在A549细胞中,Ⅰ型IFN或SFTSV感染都能够诱导IFIT3的表达。高表达IFIT3可以显著抑制SFTSV非结构蛋白NS mRNA的表达;通过siRNA抑制IFIT3的表达,则明显促进SFTSV非结构蛋白NS mRNA的表达。2.在A549细胞中高表达IFIT3可以促进产生IFN的相关信号通路关键分子TLR3,RIG-Ⅰ和MDA5的表达,从而增加IFNβ的表达,提高STAT1磷酸化水平和ISRE的活性,刺激ISG15、MxA和IFIT1等ISGs的表达,抑制IFIT3表达作用相反。研究结论:高表达IFIT3抑制SFTSV复制,抑制IFIT3表达则有利于SFTSV的复制。IFIT3可通过增加RIG-Ⅰ、TLR3和MDA5的表达,促进内源性IFNβ的产生及其下游信号通路的激活,从而发挥抑制SFTSV的作用。我们的结果表明干扰素刺激基因IFIT3在限制SFTSV感染的固有免疫中具有重要意义,该结果扩展了 IFIT3抗病毒谱。