葛根总黄酮的ADS系列吸附树脂分离比较及其与环糊精包合研究

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葛根是一种有丰富营养而且药理作用独特的药食两用资源,用途极为广泛。葛根中的异黄酮类物质作为葛根的活性成分,其药理保健功能和临床治疗作用正逐渐被人们所认识和关注。鉴于国内和国际市场迫切需要异黄酮,而目前对异黄酮的提取方法和纯化需要改进,本论文对葛根中主要活性有效成分异黄酮的提取、分离与包合作了系统的研究。实验研究内容和结果如下:1.采用L9(34)正交设计法研究葛根总黄酮乙醇提取工艺:乙醇浓度、提取时间、提取温度、固液比对葛根异黄酮提取率的影响,方差分析表明各因素显著性顺序为乙醇浓度﹥提取温度﹥固液比﹥提取时间,并根据正交计算结果确定葛根乙醇提取的最佳工艺为:60%的乙醇15倍量,70℃回流提取1小时。总黄酮提取率为93%。2.在对超声波辅助提取工艺的研究中,考察了不同超声频率对提取率的影响,结果表明:超声频率越高,总黄酮提取率就越大;且在超声频率为32kHz,其它条件不变的情况下,提取半个小时就可达到95%的提取率,效率明显高于乙醇回流提取。在对超声波提取葛根总黄酮的动力学研究中,分别对曲线进行方程模拟,结果表明Cubic曲线在一定程度上反映了超声波提取葛根总黄酮的动力学过程。3.采用静态与动态的吸附-解吸两种方法,利用紫外可见分光光度计测量葛根总黄酮的含量,研究不同的ADS系列大孔吸附树脂对总黄酮分离纯化的影响,结果表明ADS-8分离效果最好,其最佳工艺为上柱液浓度约为6.8 mg/ml,pH值5~6,吸附速率4 BV/h,400 ml蒸馏水洗去杂质,洗脱剂为70 %乙醇,洗脱流速2 BV/h,用量60 ml,经ADS-8处理的葛根总黄酮洗脱率可达94%以上。4.采用AKTA Prime层析系统分离葛根异黄酮,薄层层析法检测收集液,并用HPLC鉴定,结果表明该系统能有效地将葛根素与杂质分开,分离后的样品葛根素含量约为70%;由样品图谱与葛根素标准品图谱比较可以看出,样品中的葛根素未受到干扰,分离效果较好。5.采用连续递变浓度法确定葛根异黄酮PU与β-CD、HP-β-CD、M-β-CD、SPE7-β-CD的最佳包合摩尔比均为1:1,并用超声波法制备了各包合物;相溶解法研究了四种环糊精溶液对PU的增溶作用,并测得各条件下的平衡常数,研究表明,在25℃、37℃和45℃三种温度下,PU的浓度均随环糊精浓度的增加而呈线性增加,相溶解度曲线为AL型,验证了包合比为1:1,在实验范围内约增溶1~3倍,25℃的平衡常数较其它温度高,37℃时最低;在包合物的稳定性研究中,对各包合物和物理混合物的引湿性进行考察,结果表明,包合物的湿稳定性明显高于混合物。
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