长链非编码RNA-PRSS3P2在甲状腺乳头状癌中的表达及功能研究

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目的:探讨丝氨酸蛋白酶3假基因2(PRSS3P2)与其真基因丝氨酸蛋白酶3(PRSS3)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的表达差异及特点,分析二者在PTC中表达的临床病理意义;探讨lnc RNA-PRSS3P2对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞的生物学功能的影响。方法:1.实时荧光定量RT-PCR方法检测55例甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中PRSS3-m RNA及lnc RNA-PRSS3P2的表达情况,分析PRSS3和PRSS3P2表达的相关性以及其与临床病理特征之间关系。2.构建PRSS3P2-sh RNA慢病毒载体,转染TPC-1细胞,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测转染前后TPC-1细胞中PRSS3P2-lnc RNA表达情况;CCK-8实验检测细胞的增殖情况变化。3.免疫组织化学法检测PRSS3蛋白在55例甲状腺乳头状癌组织中的表达,分析PRSS3蛋白在甲状腺乳头状癌组织中表达情况及其与临床病理学特征的关系。结果:1.55对标本中,PRSS3-m RNA在PTC组中的表达水平明显高于癌旁非肿瘤组织组的表达水平(7.20±1.87 vs.3.69±1.36),lnc RNA-PRSS3P2在PTC组中的表达水平也高于非肿瘤组织组(7.25±1.25 vs.3.53±1.06),二者的表达差异均具有统计学意义(P<0.05)。在49例PTC组织中PRSS3表达高于癌旁组织,在47例PTC中PRSS3P2表达高于癌旁组织,其中42例PTC组织中的PRSS3和PRSS3P2的表达均高于癌旁组织。PTC患者PRSS3-m RNA相对表达量与患者性别、年龄、瘤体直径、淋巴结转移等临床病理特征无明显相关性;PTC患者lnc RNA-PRSS3P2相对表达量在不同年龄组的PTC患者中表达存在差别,其差异具有统计学意义(P<0.05),而与其它临床病理特征无明显相关性。2.TPC-1细胞转染PRSS3P2-sh RNA慢病毒表达载体后,PRSS3P2在PRSS3P2-sh RNA转染组中的表达量(3.17±0.736)明显低于空白对照组(7.92±0.583)和阴性对照组(7.48±0.894),其表达差异均具有统计学意义(P<0.05),且空白对照组和阴性对照组的表达水平之间的差异无统计学意义;PRSS3P2在PRSS3P2-sh RNA转染组中TPC-1细胞的增殖率从第2d开始低于对照组,但其差异无统计学意义(P>0.05)。3.PRSS3蛋白主要表达于甲状腺乳头状癌细胞的胞浆中,镜下呈棕黄色颗粒。PRSS3蛋白在大部分甲状腺乳头状癌组织中有表达且表达的程度有所不同,阳性率为74.55%(41/55);而在癌旁非肿瘤组织中只有2例阳性表达(在相应癌组织中也呈阳性表达),其它均为阴性;其中14例在甲状腺乳头状癌及癌旁非肿瘤组织中都为阴性PRSS3蛋白主要表达于甲状腺细胞胞浆。在55对标本中,PRSS3蛋白在PTC组织中表达率明显高于癌旁非肿瘤组织,且其不同表达程度与患者是否存在淋巴结转移相关(P<0.05),而与性别、年龄、瘤体直径、包膜侵犯等其他临床病理特征无明显相关性(P>0.05)。结论:PRSS3-m RNA和lnc RNA-PRSS3P2在PTC中的表达水平均明显升高,这提示二者可能参与了PTC的发病过程;PRSS3-m RNA和lnc RNA-PRSS3P2可以作为PTC的诊断标记物进行进一步研究。
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