论文部分内容阅读
马铃薯(Solanum tuberosum L.)是我国及世界重要的粮食作物,其对水分亏缺非常敏感。我国马铃薯种植面积的半数以上分布在干旱和半干旱地区,水分短缺对马铃薯产量和品质的影响已严重限制我国马铃薯产业的发展,培育抗旱品种是减少马铃薯干旱损失的重要手段。目前国内外对马铃薯抗旱机理的研究主要集中在形态学、生理学及转基因育种方面,以马铃薯抗旱品种叶片为材料对其抗旱机制进行蛋白质组学的研究尚未见报道。本研究比较不同干旱胁迫(干旱、半干旱、正常)对不同抗旱性马铃薯品种(宁蒗182和左力洋芋)生长和生理特性的影响,探讨干旱胁迫下马铃薯生长指标、生理代谢的变化规律,并以具备较强抗旱能力的云南马铃薯地方品种宁蒗182为试验材料,利用双向电泳及质谱技术开展干旱胁迫对其叶片蛋白质组影响的研究,结果可为揭示其抗旱的分子机制并为进一步改良马铃薯抗旱品种的选育提供参考依据。主要研究结果如下:1.对不同干旱胁迫下宁蒗182(抗旱品种)、左力洋芋(普通品种)的形态比较发现,干旱处理后,马铃薯形态与对照相比发生了明显变化。上述实验对象各项生长指标(出苗率,株高,根茎叶鲜重、干重及含水量,覆盖度,植株抗提拉性等)干旱胁迫后比正常条件下都有不同程度的下降或减少。综合各项生长指标对马铃薯抗旱性进行评价,宁蒗182的抗旱能力比左力洋芋强。在此基础上对不同干旱胁迫下宁蒗182、左力洋芋叶片的丙二醛(MDA)的含量变化以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的活性变化进行了比较研究。结果表明:在不同干旱胁迫下,宁蒗182和左力洋芋叶片MDA含量变化趋势相对一致,总体呈上升趋势,但是MDA含量增幅不同,宁蒗182较左力洋芋增加的幅度小。宁蒗182和左力洋芋的叶片酶活性变化存在很大差异,宁蒗182随着干胁迫程度的加重,叶片SOD、POD和CAT活性逐渐增强,左力洋芋POD活性随着干旱胁迫的加重逐渐增强,而SOD、CAT活性随着干旱胁迫的加重呈逐渐下降。经各项生理指标综合分析,可以判定宁蒗182的抗旱性较左力洋芋强。2.建立了马铃薯叶片蛋白质双向电泳的方法。本研究通过对马铃薯叶片蛋白质的提取方法、及不同的蛋白质样品电泳上样量和IPG胶条不同pI范围对双向电泳图谱的影响的研究,结果表明:采用改进的三氯乙酸(TCA)/丙酮法,上样量为600μg,采用pI4-7、24cm的IPG胶条可获得高分辨率的电泳图谱。优化后的方法可用于马铃薯叶片总蛋白质双向电泳的试验研究。采用优化后的方法对干旱胁迫处理的马铃薯宁蒗182叶片进行差异蛋白质组比较分析,处理与对照表达量存在显著差异的蛋白质点有40个,其中24个表达量显著上调,16个蛋白质点是在处理中特异表达;对这40个差异蛋白质进行了质谱鉴定,这些蛋白质的分别属于应激响应(16个蛋白质)、代谢(14个蛋白质)、生物调控(3个蛋白质)、运输(2个蛋白质)、发育(2个蛋白质)、细胞组成(2个蛋白质)及信号传导(1个蛋白质)等功能类型。初步揭示了马铃薯抗旱品种通过多种路径和水平的调控提高其抗性的分子机理。