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[目的] 近年的研究已发现，人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染可能与肺癌有关，而且我们的前期研究结果还证实，HPV-16癌蛋白可通过诱导缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor1α，HIF-1α)过表达，促进肺癌体内外血管生成。血管生成是实体瘤生长和转移的关键。肺癌作为实体瘤的一种，因肺部的特殊结构和功能，其血管生成更具典型性。因此，抑制肺癌血管生成在HPV相关肺癌的防治中具有重要意义。已有研究报道，绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate，EGCG]能抑制肿瘤血管生成，但EGCG对HPV相关肺癌血管生成的影响及其机制仍不清楚。所以，本研究的目的是:通过分别建立HPV-16 E6和E7癌蛋白诱导的HIF-1α过表达肺癌细胞模型和肺癌体内外血管生成模型，探讨EGCG对HPV-16 E6和E7癌蛋白诱导的肺癌血管生成的影响及其潜在的分子机制，特别是HIF-1α的中心调控作用。 [方法] 分别用EGCG（10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L）处理已转染含有HPV-16 E6或E7癌基因的EGFP质粒的肺癌细胞(A549和NCI-H460)。16h后用免疫印迹(Western blotting)检测HIF-1α、p-ERK和p-Akt的蛋白表达变化，实时定量PCR检测HIF-1α的mRNA表达变化。收集EGCG处理组和未用药处理组的条件培养液，用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测上清液中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和白介素-8（interleukin-8，IL-8）的蛋白浓度。 HIF-1α依赖性的分析:将非特异性HIF-1αsh-RNA(HIF-1αnon-specific sh-RNA，HIF-1αNS-sh-RNA)和特异性HIF-1αsh-RNA分别与pEGFP-HPV-16E6、E7共转染肺癌细胞（A549和NCI-H460），再用Western blotting检测HIF-1α、p-Akt、p-ERK的蛋白表达，并对肺癌体内外血管生成进行分析。 体外血管生成分析:用ECM625 Matrigel作为基质检测EGCG对HPV-16 E6、E7癌蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cells，HUVECs)微管形成的影响。同时将非特异性HIF-1αsh-RNA和特异性HIF-1αsh-RNA分别与pEGFP-HPV-16 E6或E7共转染肺癌细胞（A549和NCI-H460），检测HPV-16 E6、E7癌蛋白诱导的HUVECs微管形成是否具HIF-1α依赖性。 体内血管生成分析:分别收集各种处理的肺癌细胞A549和其条件培养液，与BD Matrigel Matrix混合后注射入裸鼠腋侧皮下，分析EGCG对HPV-16 E6和E7癌蛋白诱导的肺癌体内血管生成的影响以及HPV-16 E6和E7癌蛋白诱导的肺癌体内血管生成是否具HIF-1α依赖性。 [结果] 1.Western blotting结果显示:EGCG抑制了HPV-16 E6和E7癌蛋白诱导的HIF-1α过表达，且抑制作用随EGCG浓度升高而增强。HPV-16 E6和E7癌蛋白使肺癌细胞（A549和NCI-H460）中Akt和ERK的磷酸化水平增强;用EGCG处理后，随着EGCG浓度增加，p-Akt的蛋白表达水平逐渐降低，但p-ERK的蛋白表达水平无明显变化。与非特异性HIF-1αsh-RNA相比，特异性HIF-1α sh-RNA与pEGFP-HPV-16 E6、E7共转染肺癌细胞(A549和NCI-H460)后，抑制了HPV-16 E6和E7癌蛋白诱导的HIF-1α蛋白表达，同时也降低了HPV-16 E6、E7癌蛋白诱导的p-Akt蛋白表达水平，但对p-ERK蛋白表达无明显影响。说明，HPV-16癌蛋白可抑制Akt的激活，但对ERK的激活没有明显作用。 2.实时定量PCR结果显示:HPV-16 E6和E7癌蛋白对肺癌细胞(A549和NCI-H460) HIF-1α mRNA水平无明显影响，且EGCG对HIF-1αmRNA表达亦无明显作用。 3.ELISA结果显示:EGCG抑制了HPV-16 E7癌蛋白诱导的VEGF及IL-8的蛋白分泌，并具有剂量依赖性。50μmol/L、100μmol/L EGCG处理组与对照组相比，VEGF及IL-8的蛋白分泌差异具有显著性(P＜0.01)。 4.体外血管生成实验结果显示:相对于对照组(Control)、空载体组(EmptyVector)，pEGFP-HPV-16 E6和E7转染组细胞的条件培养液明显刺激了HUVECs的微管形成。当用100μmol/L EGCG处理或共转染特异性HIF-1αsh-RNA后，HPV-16 E6和E7癌蛋白刺激的HUVECs微管形成受到抑制，总管长度明显缩短(P＜0.05)。 5.体内血管生成实验结果显示:pEGFP-HPV-16 E6和E7转染组血管形成比对照组、空载体组更明显，并且pEGFP-HPV-16 E6和E7转染组血红蛋白含量及HIF-1α和VEGF蛋白表达较对照组、空载体组明显升高(血红蛋白测定P＜0.05)。当用EGCG处理pEGFP-HPV-16 E6和E7转染组及特异性HIF-1αsh-RNA与pEGFP-HPV-16 E6、E7共转染后血管生成明显减少，且血红蛋白含量及HIF-1α和VEGF蛋白表达亦明显降低。 [结论] HPV-16 E6、E7癌蛋白以HIF-1α依赖的方式诱导肺癌体内外血管生成，而EGCG可抑制HPV-16 E6、E7癌蛋白诱导的肺癌体内外血管生成，其机制可能与抑制HIF-1α蛋白表达、VEGF和IL-8的蛋白分泌及HIF-1α依赖的Akt激活有关，说明HIF-1α可能是EGCG抗HPV相关肺癌血管生成的重要潜在靶点。