【摘 要】
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目的:探究F-BAR家族膜张力分子FNBP1在泛癌中的广泛表达及预后影响,并着重对肝细胞癌中FNBP1的表达及预后进行个性化生物信息学分析。构建FNBP1-p Genesil-1沉默质粒,对常见的人肝癌细胞系进行转染。验证沉默质粒有效敲低FNBP1的表达。观察FNBP1在沉默之后,肝癌细胞的侵袭运动能力的变化。并探究膜张力分子FNBP1参与MHCC97H高侵袭细胞侵袭运动过程中桩蛋白周转效率的调控
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目的:探究F-BAR家族膜张力分子FNBP1在泛癌中的广泛表达及预后影响,并着重对肝细胞癌中FNBP1的表达及预后进行个性化生物信息学分析。构建FNBP1-p Genesil-1沉默质粒,对常见的人肝癌细胞系进行转染。验证沉默质粒有效敲低FNBP1的表达。观察FNBP1在沉默之后,肝癌细胞的侵袭运动能力的变化。并探究膜张力分子FNBP1参与MHCC97H高侵袭细胞侵袭运动过程中桩蛋白周转效率的调控机制。方法:利用Oncomine,TIMER,R语言,Perl语言等生物信息学数据库及开源软件对大数据进行总结归纳。通过双酶切p Genesil-1骨架质粒,将带有双黏性末端的沉默发夹sh RNA,通过变性-退火后与载体骨架进行连接。利用脂质体转染法对肝癌细胞株进行转染。通过RT-PCR和Western Blot对转染后的各细胞株的FNBP1表达情况进行验证。运用划痕实验,Transwell侵袭实验,迁移实验,CCK-8细胞活力检测方法对转染后的细胞株进行生物学效应的验证。运用Western Blot的方法对Paxillin,FAK,PAK蛋白的关键磷酸化节点进行探索验证。运用image-J,image-lab,Graph Pad等软件进行显著性分析。结果:生物信息学分析表明FNBP1与正常对照组织相比在多种癌组织中表达上调,且并对多种肿瘤的生存期产生广泛影响。FNBP1的表达可作为肝细胞癌的独立预后因子。成功构建了沉默质粒p Genesil-FNBP1,转染肝癌细胞系并已证实转染后细胞中FNBP1的表达被有效降低。沉默后的肝癌细胞系的迁移侵袭能力显著减低。FNBP1表达降低后,随着时间进展,在0-72小时间,与运动迁移高度相关的桩蛋白,黏附斑激酶,p21蛋白激活激酶等节点的磷酸化水平也有明显的下调。
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