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目的:构建pHBLV-BCL2/Ig H-CAR质粒,为制备表达嵌合抗原受体BCL2/Ig H-CD28-CD3ζ的慢病毒奠定基础,为FL等恶性淋巴瘤的免疫治疗探索新方法。方法:（1）设计嵌合抗原受体Hinge-TM-CD28-CD3ζ片段,其中铰链区（Hinge）和跨膜区（TM）来自Ig G4 Fc（Genbank:AAB59394.1）,共刺激分子来自CD28（Genbank:AF222341.1）,胞内信号肽来自CD3ζ（Genbank:AK313946.1）,将上述基因片段相应功能区交由生物公司合成,且各个片段之间是直接连接的。（2）利用Eco RI和Bam HI双酶切Hinge-TM-CD28-CD3ζ片段,将其克隆至慢病毒载体pHBLV-CMV-MCS-EF1-Zs Green的Eco RI和Bam HI酶切位点,获得质粒pHBLV-CD28-CD3ζ,进行琼脂糖凝胶电泳、双酶切鉴定。（3）选用BCL2/Ig H作为靶向抗原,TRIZOL法从DOHH2细胞中提取总m RNA,RT-PCR扩增、测序获得BCL2/Ig H融合基因序列,与Genbank中的BCL2基因和Ig H基因序列进行比对;结合测序结果,将BCL2和Ig H基因CDS区序列,通过化学方法全基因合成BCL2/Ig H融合基因片段。（4）利用Eco RI单酶切BCL-2/Ig H基因,将BCL-2/Ig H目的基因克隆入pHBLV-CD28-CD3ζ质粒的Eco RI酶切位点,构建成pHBLV-BCL2/Ig H-CAR质粒;采用菌落PCR方法判断BCL2/Ig H与pHBLV-CD28-CD3ζ的连接是否正确,DNA测序验证各碱基是否正确。结果:（1）本实验设计和合成嵌合抗原受体Hinge-TM-CD28-CD3ζ表达框。（2）构建了pHBLV-CD28-CD3ζ质粒,琼脂糖凝胶电泳、双酶切鉴定结果提示目的片段Hinge-TM-CD28-CD3ζ克隆入慢病毒载体内。（3）从人源性滤泡性淋巴瘤DOHH-2细胞株提取和合成BCL2/Ig H目的基因,测序结果与BCL2/Ig H Genbank号（NM000633.2,NC000014.9）中的序列一致。（4）构建了pHBLV-BCL2/IgH-CAR质粒,菌落PCR鉴定结果符合预期,DNA测序序列与设计碱基序列完全相同。结论（1）pHBLV-CD28-CD3ζ质粒的构建,为下一步将BCL2/Ig H目的基因克隆至慢病毒载体提供了实验条件。（2）pHBLV-BCL2/Ig H-CAR质粒的构建,为制备表达BCL2/Ig H-CD28-CD3ζ基因的慢病毒奠定基础。（3）本实验选取BCL2/Ig H融合基因作为靶向抗原,扩大了CAR-T细胞免疫治疗的应用范围,为其他类型恶性淋巴瘤特异性细胞免疫治疗、CAR-T精准化治疗提供了有价值的参考资料。