论文部分内容阅读
天然橡胶是重要战略物资和工业原料,而橡胶树“死皮”危害巨大,是产业发展的限制因子,因此研究和阐明橡胶树死皮发生的机制,具有重大的理论和实际意义。在前期工作中,我们已经通过DDRT-PCR技术鉴定和克隆到了一个和死皮抗性相关的基因,命名为HbMyb1。对HbMyb1的表达分析结果可知,在橡胶树中,死皮越严重,离病灶越近的部分,HbMyb1的表达就越低,反之就越高(Chen,etal.,2003)。PSORT蛋白质定位信号分析提示,HbMyb1基因表达产物有可能是核蛋白。结构分析和构象预测表明,HbMyb1有HTH DNA结合域,且具有多个磷酸化位点。说明HbMyb1产物可能是一个转录因子。而且,HbMyb1产物和拟南芥类myb基因相关的转录激活因子同源性高达59%,而myb类基因具有促进细胞增殖和抑制细胞凋亡的功能。同时,电镜观察结果发现死皮树乳管细胞核染色质有凝聚现象。据此,我们提出“橡胶树死皮可能是细胞凋亡的新现象,HbMyb1可能是细胞凋亡的负调控因子”的新观点。本研究正是沿着这一思路设计一套系统有效的方法来证实上述观点,以揭示多年以来全世界在该领域苦苦探索的橡胶树死皮发生和发展的奥秘。 为验证橡胶树死皮是一种植物细胞凋亡的现象,我们首先分别提取橡胶树无性系PR107和RRIM600健康树、死皮树的树皮DNA,并用1.5%琼脂糖胶进行电泳分析。结果表明死皮树树皮DNA均呈典型的DNA梯度条带(DNA ladder),而健康树树皮DNA呈完整的一条带(图1)。对于坏死细胞而言,基因组DNA降解随机发生,在电泳胶上只能检测到连续分布的DNA条带。对于PCD细胞而言,基因组DNA降解并不是随机发生,在电泳胶上出现的是长度为180～200bp倍数的梯状条带(DNA ladder),这是一种专一核酸内切酶降解核小体间DNA的结果。因此,梯状条带的存在与否是区分PCD与坏死的标准之一。我们从橡胶死皮树的树皮提取的DNA电泳结果存在典型的DNA梯状条带(图1),说明橡胶树死皮是一种植物细胞凋亡的现象。 TUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling reaction,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记反应)是一种检测DNA片段3′末端羟基的方法。在末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导下,荧光素—12-dUTP