论文部分内容阅读
目的: 本课题通过动物实验,观察方剂健胃补脾汤对乙醇性小鼠胃黏膜损伤保护作用及相关作用机制,探究健胃补脾汤发挥保护作用的可能机制,为健胃补脾汤对乙醇性胃黏膜损伤保护作用的分子机制提供直接的实验依据,并且为乙醇性胃黏膜损伤性胃溃疡(GU)的预防与治疗提供新的药物防治思路,为临床治疗乙醇性胃黏膜损伤类疾病提供指导和客观依据。 方法: 1、清洁级(Ⅱ级)健康小白鼠96只,体重25-30g不等,雌雄各半,由浙江中医药大学实验中心提供。将其称重后编号,随机分成6组,每组雌雄各半,分别为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(给予灌胃对胃黏膜损伤有保护作用的西咪替丁)、保护组(包括中药低剂量组、中药中剂量组和中药高剂量组三组),每组小鼠均为16只。 2、建立小鼠乙醇性胃黏膜损伤模型。正常对照组给予动物生理盐水灌胃7天,剂量8ml/kg鼠重;模型对照组首先给予动物生理盐水灌胃两天,剂量8ml/kg鼠重,于第三天开始灌胃55%的乙醇,每天给药一次,8ml/kg鼠重,连续5天;阳性对照组给予Cim7mg/Kg,其剂量由临床常用剂量折算得来。该剂量为大量文献常用剂量,已获得认可剂量。中药保护组:分别给予小鼠低、中、高剂量(3ml/kg,6ml/kg,9ml/kg)的健胃补脾汤灌胃7天,于第3天灌胃健胃补脾汤预保护后2h开始灌胃55%乙醇,每天给药一次,连续5天。上述各组按照描述给药方法连续给药7d,每日一次。在第六天灌胃结束后,立即实施禁食不禁水24h。处死,从病理形态学进一步观察健胃补脾汤对乙醇致小鼠胃黏膜损伤的保护作用,并检测各组小鼠血清中一氧化氮(NO)、血浆前列腺素E2(PGE2)以及Ⅱ相酶中醌还原酶(quninone reductase,QR)的含量,探讨健胃补脾汤防治小鼠乙醇性胃黏膜损伤的相关分子机制。 3、应用免疫组化法检测小鼠胃黏膜组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的平均光密度值的变化,根据其数值的变化,来探讨健胃补脾汤发挥作用的调控机制。 4、进行Pearson相关性分析,分析健胃补脾汤与小鼠血清NO、PGE2、QR浓度及胃黏膜iNOS平均光密度值变化的相关性。 结果: 1、根据动物实验所得损伤率及损伤抑制率,可得出阳性对照组以及各中药治疗组均能显著抑制小鼠乙醇性胃黏膜损伤的发生,中药中剂量组与中药高剂量组对乙醇性胃黏膜损伤的抑制作用均明显强于阳性对照组(p<0.05),具有统计学意义。 2、通过对健胃补脾汤对小鼠血清中NO含量变化的分析,可得知血清NO含量,模型对照组与中药低剂量治疗组血清中NO含量明显低于正常对照组,且具有统计学意义(p<0.05);中药低剂量组血清NO含量虽然高于模型对照组,但是不具有统计学意义(p>0.05);正常对照组、阳性对照组、中药中、高剂量组血清NO含量比模型对照组要高,且具有统计学意义(p<0.05);与阳性对照组相比,中药中、高剂量组血清 NO含量升高,且具有统计学意义(p<0.05)。说明中、高剂量的健胃补脾汤能使NO含量升高,从而起到对乙醇性胃黏膜损伤的保护作用。 3、通过对健胃补脾汤对小鼠血清中PGE2含量变化的分析,可得知血清PGE2含量,模型对照组与中药低剂量治疗组血清中PGE2含量明显低于正常对照组,且具有统计学意义(p<0.05);中药低剂量组血清PGE2含量虽然高于模型对照组,但是不具有统计学意义(p>0.05);正常对照组、阳性对照组、中药中、高剂量组血清PGE2含量比模型对照组要高,且具有统计学意义(p<0.05);与阳性对照组相比,中药中、高剂量组血清PGE2含量升高,且具有统计学意义(p<0.05)。说明中、高剂量的健胃补脾汤能使PGE2含量升高,从而起到对乙醇性胃黏膜损伤的保护作用。 4、通过对健胃补脾汤对小鼠血清中QR含量变化的分析,可得知血清QR含量,模型对照组与中药低剂量治疗组血清中QR含量明显低于正常对照组,且具有统计学意义(p<0.05);中药低剂量组血清QR含量虽然高于模型对照组,但是不具有统计学意义(p>0.05);正常对照组、阳性对照组、中药中、高剂量组血清QR含量比模型对照组要高,且具有统计学意义(p<0.05);与阳性对照组相比,中药中、高剂量组血清QR含量升高,且具有统计学意义(p<0.05)。说明中、高剂量的健胃补脾汤能使QR含量升高,从而起到对乙醇性胃黏膜损伤的保护作用。 5、本实验中所得数据显示,与正常对照组相比,模型对照组与各中药剂量组小鼠胃黏膜组织中(iNOS)平均光密度值均有不同程度升高,差异有统计学意义(p<0.05);与阳性对照组相比,中药中高剂量组的(iNOS)平均光密度值均有不同程度升高,差异有统计学意义(p<0.05);中药低剂量组iNOS平均光密度值虽高于模型对照组,但无统计学意义(p>0.05);中药中剂量组与高剂量组iNOS平均光密度值均高于模型对照组,差异具有统计学意义(p<0.05)。说明中、高剂量的健胃补脾汤对于胃黏膜iNOS的表达有促进作用,从而对胃黏膜损伤起到保护作用。 6、本研究通过进行Pearson相关性分析,得出健胃补脾汤浓度与血清NO、PGE2、QR浓度及胃黏膜iNOS平均光密度值的变化存在相关性,且成正相关;具有统计学意义(p<0.05),提示健胃补脾汤具有保护乙醇性胃黏膜损伤的作用。 结论: 1、通过动物实验,得出上述结果,提示健胃补脾汤在一定程度上能够防治乙醇对小鼠胃黏膜的损伤,是防治小鼠乙醇性胃黏膜损伤的有效药物。 2、健胃补脾汤对小鼠乙醇性胃黏膜损伤的保护作用可能是通过增加小鼠血清中NO、PGE2、QR及胃黏膜中iNOS的含量来实现的,从而使胃黏膜血管舒张,增加胃黏膜血流量,促进胃黏膜损伤的修护。 3、通过进行Pearson相关性分析,得出健胃补脾汤的浓度与血清NO、PGE2、QR浓度及胃黏膜iNOS平均光密度值的变化存在相关性,且成正相关,提示健胃补脾汤具有保护乙醇性胃黏膜损伤的作用。