【摘 要】
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猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible Gastroenteritis Virus of Swine,TGEV)是引起猪传染性胃肠炎(Transmissible Gastroenteritis of Swine,TGE)的病原,属于套式病毒目,冠状
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猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible Gastroenteritis Virus of Swine,TGEV)是引起猪传染性胃肠炎(Transmissible Gastroenteritis of Swine,TGE)的病原,属于套式病毒目,冠状病毒科,冠状病毒属。TGEV有四种主要的结构蛋白:①纤突糖蛋白(S);②膜糖蛋白(M);③核衣壳磷蛋白(N);④小包膜蛋白(sM)。纤突糖蛋白(S蛋白)携带主要的B淋巴细胞抗原决定簇,是唯一能够诱导产生中和抗体和提供免疫保护的结构蛋白。本研究利用PCR方法和点突变技术,成功克隆了TGEV-S基因。随后构建了表达载体pBAC176,该表达载体以EPSP基因作为选择标记,其目的基因TGEV-S以增强型启动子E35S为驱动。为进一步提高目的基因表达量和筛选工作效率,构建了表达载体pBAC178,该表达载体以紫色编码基因(LC/PL)作为筛选标记,其目的基因TGEV-S以玉米胚乳特异性启动子(Zein)为驱动。利用基因枪介导基因转化技术,通过构建表达载体pBAC176和pBAC178,将TGEV-S基因导入玉米幼胚愈伤组织,分别获得当代转基因植株32棵和42棵。利用PCR和PCR-Southern检测表明,第一批转基因苗中有7株和第二批转基因苗中有2株的检测结果呈阳性。为进一步研究转基因玉米植株表达S蛋白免疫原性、免疫效力测定和动物口服免疫实验打下基础。
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