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多药耐药(Multidrug Resistance，MDR)是目前造成肿瘤化疗失败的重要原因，寻找合适的MDR逆转剂已成为肿瘤药物研究的关键性问题。本研究建立了肿瘤细胞多药耐药逆转剂的筛选体系，然后对多种中草药和天然产物进行了筛选，筛选出了两种对不同耐药细胞系均具有较好逆转性的生物碱，并对逆转机制做了初步的探索。
首先，本研究建立了筛选肿瘤多药耐药逆转剂的体系。本实验选取了两种不同的耐药细胞系建立了三种不同耐药蛋白的多药耐药逆转剂的筛选体系。P-gp蛋白是研究最早也是研究最为透彻的耐药蛋白，在本研究中，首先在功能上确定了多药耐药细胞MCF-7/Adr中P-gp蛋白的外排功能，然后通过RT-PCR在细胞中检测到了P-gp蛋白RNA水平的表达，最后通过SRB细胞毒实验发现细胞毒性药物doxorubicin的IC50值在MCF-7及其耐药细胞系MCF-7/Adr中分别6.86±0.20μ M和40.5±1.65μ M，耐药倍数达到了5.90倍；加入逆转剂Verapamil处理后，MCF-7/Adr的IC50值为1.7±0.12μ M，逆转倍数为23.69。IC50值的降低，BCRP是较晚发现的ABC家族成员，本研究中，功能上确定了MCF-7/Adr细胞中BCRP蛋白的外排功能，然后通过RT-PCR在细胞中检测到了BCRP蛋白RNA水平的表达，最后发现对MCF-7及其耐药细胞系MCF-7/Adr来说，Mitoxantrone的IC50值分别为37.72±1.85μ M和6.32±0.10μ M，耐药倍数为5.96倍；逆转剂FTC处理过后的Mitoxantrone的IC50值为1.63±0.01，逆转倍数为23.10。MRP1蛋白也是重要的多药耐药蛋白。本研究中，功能上确定了a549/DDP细胞中MRP1蛋白的外排功能，然后通过RT-PCR在细胞中检测到了MRP1蛋白RNA水平的表达，最后发现a549及其耐药细胞系a549/DDP，Doxorubicin的IC50值分别为4.43±0.248μ M和0.31±0.01μ M，耐药倍数达到了14.47倍。MK571处理过的a549/DDP的IC50为0.52±0.03μ M，逆转倍数为8.57.
其次利用建立好的筛选体系，从多种中草药提取物和天然产物中，成功筛选出来了两种具有逆转活性的天然产物胡椒碱(Pip)和海罂粟碱(Gla)。其中，胡椒碱和海罂粟碱均对a549/DDP和MCF-7/Adr的耐药性有一定的逆转活性，且该活性具有一定的浓度依赖和时间依赖性。对于a549/DDP来说，50μ M胡椒碱(Pip)处理后的IC50为0.28±0.02μ M，逆转倍数达到了14.14倍。对50μ M海罂粟碱(Gla)处理后的IC50为0.60±0.06μ M，逆转倍数也达到了12.42倍；对于MCF-7/Adr来说，50μ M胡椒碱(Pip)处理后的IC50为1.26±0.20μ M，逆转倍数达到了32.15倍。而对50μ M海罂粟碱(Gla)处理后的IC50为0.86±0.23μ M，逆转倍数也达到了46.64倍。
最后，本研究对多药耐药逆转剂的逆转机制做了初步探索，发现逆转机制与细胞内多药耐药蛋白的转录水平降低有关。其中胡椒碱(Pip)和海罂粟碱(Gla)均降低了a549/DDP细胞内mrpl RNA的水平，而且也降低了MCF-7/Adr细胞内mdrl RNA和bcrp RNA的水平。