【摘 要】
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槟榔（Areca catechu）为棕榈科（Arecaceae）槟榔属多年生单子叶热带木本植物,目前槟榔的相关植物学和分子生物学研究明显滞后于棕榈科其他物种。因此,建立一个体外基因功能验证平台是槟榔基础研究的重要前提和基础。本文利用酶解法通过对槟榔嫩花苞、嫩叶片、胚状体三种不同材料及酶解时间的对比,建立了槟榔原生质体分离体系,分离出数量9.1×10~7个/m,活力为92%的原生质体并进行PEG介导
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槟榔（Areca catechu）为棕榈科（Arecaceae）槟榔属多年生单子叶热带木本植物,目前槟榔的相关植物学和分子生物学研究明显滞后于棕榈科其他物种。因此,建立一个体外基因功能验证平台是槟榔基础研究的重要前提和基础。本文利用酶解法通过对槟榔嫩花苞、嫩叶片、胚状体三种不同材料及酶解时间的对比,建立了槟榔原生质体分离体系,分离出数量9.1×10~7个/m,活力为92%的原生质体并进行PEG介导的槟榔原生质体和农杆菌介导的槟榔胚状体瞬时转化体系的建立及优化。主要研究如下:1:花苞在酶解4h产量和活力最高,产量为9.1×10~7个/ml,活力为92%;热激30min转化效率达到0.6%;PEG孵育40min为最佳孵育时间转化效率达到0.8%;热激前加入PEG转化效率达到13%。再将p35-egfp、p35-myb108-egfp转入槟榔原生质体,在共聚焦显微镜观察到p35-egfp在整个细胞,p35-myb108-egfp在细胞核里。在对两个载体进行荧光定量分析,egfp与myb108都成功被过表达。2:筛选标记潮霉素（hyg）浓度为30mg/L时胚状体被抑制住全部死亡。在筛选培养基中加入特美汀浓度为400mg/L时,污染率为0%,农杆菌被完全抑制住,并且特美汀的400mg/L浓度不会影响转基因胚状体再生。用菌液浓度0.5,侵染时间5min转化效率最高达到0.2%。对槟榔胚状体用浸泡、注射、抽真空三种方式进行转化,结果显示浸泡方式的转化效率最高。在侵染液中加入AS浓度为20mg/L时转化效率为1.6%。共培养的最适温度为24℃时间为4天转化效率可达3.5%。在转入带有egfp和潮霉素（hyg）筛选标记的载体进行鉴别,再生胚状体中可以检测到抗性基因条带和egfp蛋白的表达,荧光定量（QPCR）显示egfp基因与潮霉素（hyg）基因都被成功过表达。
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