毒死蜱（Chlorpyrifos，CPF）作为一种在环境中广泛使用的有机磷农药，具有确定的胚胎神经发育毒性。脑多巴胺能神经系统对有机磷农药暴露敏感，并关联多种认知情感异常疾病，目前关于其在胚胎脑组织细胞中的研究还少有报道。本课题于胚胎早期暴露毒死蜱，探讨其对多巴胺能神经元相关脑区域神经细胞的影响，并进一步利用计算机三维重构技术，研究对区域整体形态的影响，从宏观与微观层次上检测毒死蜱的毒理效应。　　一、胚胎期暴露毒死蜱对纹状体、腹侧被盖区、黑质区神经细胞的影响:　　在胚胎E7.5-11.5天暴露0，5mg/kg CPF，制备E14、E16、E18定时胚胎，通过定位脑组织切片和Nissl染色，对纹状体、腹侧被盖区、黑质区计数神经细胞数量，进行统计分析，研究结果发现:　　(1)纹状体区:纹状体区观测到神经元呈现圆形、椭圆形，具有胞体，在胞体中央有大而圆的胞核，胶质细胞表现为颗粒状，形态呈现扁平、三角形、星形状;毒死蜱处理后，细胞整体形态上并无显著性改变，但细胞密度与正常组相比，略微松散。　　毒死蜱处理后E14神经元减少12.78±0.5％，胶质细胞减少31.93±3.0％;E16神经元减少11.09±1.6％，胶质细胞减少26.98±1.2％;E18神经元减少11.0±0.5％，胶质细胞减少22.02±1.7％。　　(2)腹侧被盖区:腹侧被盖区可以观测到神经元的胞体、突起，甚至可以观察到树突;胶质细胞展现圆形、梭形状。毒死蜱处理后，与正常组相比，细胞在整体上无明显变化。　　毒死蜱处理后E14胶质细胞减少34.25±2.9％;E16胶质细胞减少27.92±4.0％;E18胶质细胞减少12.0±1.1％，但神经元无统计学差异。　　(3)黑质区:黑质区神经元展现为椭圆形或锥形状，突起较为明显，胞核染色较淡;胶质细胞具有突起，但不具备树突与轴突，形态呈现梭形、圆形。毒死蜱处理后，细胞整体形态上无明显性差异，但细胞密度与正常组相比，排列略微松散。　　毒死蜱处理后E14神经元减少9±1.4％，胶质细胞减少36.47±4.5％;E16神经元减少10.09±1.7％，胶质细胞减少32.79±3.0％;E18神经元减少7.29±0.6％，胶质细胞减少23.52±3.4％。　　总体来看，胚胎期暴露毒死蜱对细胞形态无明显影响，但明显减少纹状体、腹侧被盖区、黑质区三个区域的胶质细胞数量，减少纹状体、黑质区的神经元数量而对腹侧被盖区的神经元数量无明显影响，在两类细胞中，毒死蜱对胶质细胞的影响强于对神经元的影响。　　二、毒死蜱对胚胎脑多巴胺能神经元的影响:　　采用TH免疫荧光染色方法，进一步研究胚胎期暴露毒死蜱对相关脑区多巴胺能神经元的影响，研究结果发现:　　1)腹侧被盖区:腹侧被盖区分布大量的多巴胺能神元，排列成不规则分布，多巴胺能神经元呈现椭圆形，胞体大小展现为中等。毒死蜱处理后，多巴胺能神经元形态无明显性变化。　　毒死蜱处理后DAPI标记细胞减少9.50±0.8％，但多巴胺能神经元数量及TH/DAPI没有统计学差异。　　2)黑质区:黑质区多巴胺能神经元密度集中，排列散乱，神经元成锥体状。毒死蜱处理后，神经元整体形态上无显著性变化，但排列与正常组相比，略微散乱。　　毒死蜱处理后DAPI标记的细胞减少14.24±1.5％，多巴胺能神经元减少11.51±0.5％，TH/DAPI没有统计学差异。　　总体来看，胚胎期暴露毒死蜱对腹侧被盖区和黑质区DAPI标记细胞均有明显抑制作用，对多巴胺能神经元也有一定的抑制作用，但不改变TH/DAPI比值，这说明毒死蜱对多巴胺能神经元的抑制作用是非选择性的。　　三、毒死蜱对胚胎脑纹状体三维形态的影响:　　对E16纹状体区域的连续切片进行显微拍照，经Photoshop CC、Image Pro Plus配准调整，3D Doctor三维重构，构建出纹状体三维立体结构，分析相关数值。　　研究结果发现，E16纹状体Control组体积为0.43mm3，CPF组为0.42mm3;Control组表面积为13.43mm2，CPF组为9.40mm2。　　综合上述结果，我们发现胚胎期暴露毒死蜱，对神经细胞微观层次具有显著性的影响;但在宏观形态上，毒死蜱对区域整体结构影响很小。