目的本课题主要是深入研究Sp1、IRF1和IRF2调控载脂蛋白L1基因表达的机制。方法提取细胞RNA并逆转录成cDNA，利用PCR的方法，扩增IRF2全长基因片段，将其克隆到pflag-cmv-2表达载体上,命名为pFLAG-IRF2。其它反式作用因子由博尚生物技术有限公司合成，并分别命名为pFLAG-Sp1, pFLAG-Sp3,pFLAG-KLF4, pFLAG-KLF6, pFLAG-IRF1, pFLAG-IRF3, pFLAG-IRF9。将各反式作用因子与启动子通过瞬时转染的方法导入细胞，48小时后利用双荧光素酶报告检测试验检测荧光值,通过此方法初步筛选出可能的反式作用因子Sp1、IRF1及IRF2。在此基础上进行电泳迁移率实验,若核蛋白能与探针结合，其在非变性凝胶上的电泳速度会减慢，从而形成阻滞带，若再与抗体结合，其速度会进一步减慢，形成超阻滞带。通过电泳迁移率竞争实验及超阻滞试验进一步确认了Sp1和IRF2能与该启动子区域直接结合。由于细胞中IRF1表达量低,在首次超阻滞实验中，IRF1并未出现超阻滞条带。提取经过INF-γ干预48小时后的细胞核蛋白，并经Western Blot确定IRF-1表达量增加后，再进行超阻滞试验，出现了超阻滞条带，证实了IRF-1也可以与该启动子区域直接结合。结果1.成功构建pFLAG-IRF2表达克隆；2.过表达pFLAG-Sp1及pFLAG-IRF1、pFLAG-IRF2增加ApoL1的启动子活性；3. INF-γ能促进IRF1的表达增加，而对IRF2没有影响。结论1.初步确定Sp1及IRF1、IRF2三个反式作用因子在ApoL1的转录调控中起着重要作用；2. IFN-γ促进IRF1的表达,而对IRF2没有影响。