脑卒中是导致人类死亡的主要疾病之一，也是导致成人遗留残疾的主要原因，其中脑梗塞占了70%以上。大多数的脑梗塞患者残留有不同程度的永久性缺陷。但是，在众多缺血性脑卒中的研究和实验中发现，尽管脑梗塞造成的神经功能损害很严重，可在梗塞后康复的各个不同阶段，人的大脑功能和组织结构可以发生改变和重组，出现不同的可塑性变化，受损功能仍能够得到不同程度的恢复。神经可塑性属于神经系统的自有属性和特殊表现，泛指神经系统所具有的改变自身结构和功能以适应内外环境变化的能力。目前神经可塑性的机制尚未明确，大量研究提出神经突触形态的改变，新的树突和树突棘的再生和连接，轴突分布部位的转化，突触内神经递质浓度的调整，突触受到兴奋性或抑制性改变以及部分新神经元的分化和生长与神经可塑性相关。　　血小板活化因子（platelet activating factor，PAF）是磷脂类生物活性介质及细胞因子。大量动物实验表明，PAF参与了脑梗死发生、发展的病理过程，与动脉粥样硬化、缺血性脑血管病的转归密切关联。重要的是，PAF可促进脑缺血后氧化应激，抑制神经细胞可塑性。血小板活化因子乙酰水解酶（platelet activating factor acetylhydrolase，PAF-AH）通过水解PAF使之失活，并与脂蛋白代谢和炎症途径相关。在高血压、缺血性卒中、尿毒症、艾滋病等疾病患者血中可出现升高现象，而高活性的PAF-AH能显著抑制氧化应激连锁反应，对血管内皮具有保护性作用。　　有研究提出，脑缺血后神经重塑过程中起关键促进作用的因子包括了神经生长因子（ nerve growth factor ， NGF ）、生长相关蛋白-43 （ growth associated protein-43，GAP-43）、神经微丝（200-kd aneurofilament，NF200）、候选可塑性相关基因 15 （ candidate plasticity-related gene 15 ， CPG15 ）、分泌神经素（secretoneurin，SN）、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）等。其中SN被证实能够促进未成熟大脑颗粒细胞层轴突生长，其神经保护机制得到研究。体内和体外实验均支持SN可以使干细胞靶向作用于缺血灶，并能促进血管发生，增加局部脑血供的作用。候选可塑性相关基因15（CPG15）近年被认为是与神经再塑密切关联因子，现已逐渐成为神经再生领域研究热点。CPG15的蛋白表达可以促进受损神经元细胞的修复与再生，对神经轴突的发育也有重要作用。文献报道，经侧脑室给予蛇毒神经生长因子（vNGF）可以正向调节CPG15和核转录因子κB的表达促进脑缺血再灌注后神经缺损的功能恢复。结合相关理论基础，同时前期工作研究结果提示rPAF-AH 是一种值得期待的治疗脑梗死的生物医药制剂。因此，本课题探讨rPAF-AH对局灶性脑缺血大鼠缺血区CPG15和SN表达的影响，目前国内外未见有与本课题设想的类似报道，旨在尝试发现新的积极有效的脑梗死干预手段，期望应用于促进缺血脑神经重塑和脑功能恢复。　　第一章 重组血小板活化因子乙酰水解酶对局灶性脑缺血大鼠分泌神经素表达的影响　　目的：　　探讨重组人血小板活化因子乙酰水解酶（rPAF-AH）对局灶性脑缺血大鼠缺血区分泌神经素（SN）表达的影响。　　方法：　　选择SD大鼠45只，随机分为生理盐水组、rPAF-AH组、假手术组，每组15只，前2组建立大脑中动脉栓塞模型，假手术组大鼠除未进行颈总动脉剪开、线栓置入及颈总动脉结扎缝合，余与生理盐水组和rPAF-AH组操作相同。给药方式利用大鼠脑立体定位仪进行，于前囟后0.8～1.0mm，头尾正中线左侧旁开1.8～2.0mm，深度4.0～5.0mm，进行左侧侧脑室埋管。rPAF-AH组制模后即刻开始侧脑室注入rPAF-AH，剂量为50μg/（kg.d）20μl，生理盐水组实验开始后侧脑室注入生理盐水20μl/d。每组再分为2、7、14d 3个时间点，每个时间点5只大鼠处死取脑组织用于实验，运用酶联免疫吸附测定法检测SN表达水平。　　结果：　　生理盐水组和rPAF-AH组2、7、14d缺血区SN表达明显高于假手术组，均有统计学差异（P<0.01），7d缺血区SN表达最高，且rPAF-AH组7d缺血区SN表达明显高于生理盐水组，差异有统计学意义（P<0.01）。　　结论：　　rPAF-AH能够上调局灶性脑缺血大鼠缺血区SN表达水平。　　第一章 重组血小板活化因子乙酰水解酶对局灶性脑缺血大鼠分泌神经素表达的影响　　目的：　　探讨重组人血小板活化因子乙酰水解酶（rPAF-AH）对局灶性脑缺血大鼠缺血区分泌神经素（SN）表达的影响。　　方法：　　选择SD大鼠45只，随机分为生理盐水组、rPAF-AH组、假手术组，每组15只，前2组建立大脑中动脉栓塞模型，假手术组大鼠除未进行颈总动脉剪开、线栓置入及颈总动脉结扎缝合，余与生理盐水组和rPAF-AH组操作相同。给药方式利用大鼠脑立体定位仪进行，于前囟后0.8～1.0mm，头尾正中线左侧旁开1.8～2.0mm，深度4.0～5.0mm，进行左侧侧脑室埋管。rPAF-AH组制模后即刻开始侧脑室注入rPAF-AH，剂量为50μg/（kg.d）20μl，生理盐水组实验开始后侧脑室注入生理盐水20μl/d。每组再分为2、7、14d 3个时间点，每个时间点5只大鼠处死取脑组织用于实验，运用酶联免疫吸附测定法检测SN表达水平。　　结果：　　生理盐水组和rPAF-AH组2、7、14d缺血区SN表达明显高于假手术组，均有统计学差异（P<0.01），7d缺血区SN表达最高，且rPAF-AH组7d缺血区SN表达明显高于生理盐水组，差异有统计学意义（P<0.01）。　　结论：　　rPAF-AH能够上调局灶性脑缺血大鼠缺血区SN表达水平。　　第二章 重组血小板活化因子乙酰水解酶对局灶性脑缺血大鼠候选可塑性相关基因15蛋白及基因表达的影响　　目的：　　探讨重组人血小板活化因子乙酰水解酶（rPAF-AH）对局灶性脑缺血大鼠缺血区候选可塑性相关基因15（CPG15）蛋白及基因表达的影响。　　方法：　　选择SD大鼠45只，随机分为生理盐水组、rPAF-AH组、假手术组，每组15只，前2组建立大脑中动脉栓塞模型，假手术组大鼠除未进行颈总动脉剪开、线栓置入及颈总动脉结扎缝合，余与生理盐水组和rPAF-AH组操作相同。给药方式利用大鼠脑立体定位仪进行，于前囟后0.8～1.0mm，头尾正中线左侧旁开1.8～2.0mm，深度4.0～5.0mm，进行左侧侧脑室埋管。rPAF-AH组制模后即刻开始侧脑室注入rPAF-AH，剂量为50μg/（kg.d）20μl，生理盐水组实验开始后侧脑室注入生理盐水20μl/d。每组再分为2、7、14d3个时间点，每个时间点5只大鼠处死取脑组织用于实验，运用Western-blot法及实时定量PCR技术检测CPG15蛋白及mRNA表达水平。　　结果：　　（1）生理盐水组和rPAF-AH组2、7、14d缺血区CPG15 mRNA表达明显高于假手术组，均有统计学差异（P<0.01），7d缺血区CPG15 mRNA表达最高，且rPAF-AH组7d缺血区CPG15表达高于生理盐水组（P<0.05）。　　（2）生理盐水组和rPAF-AH组2、7、14d缺血区CPG15蛋白表达明显高于假手术组，均有统计学差异（P<0.01），7d缺血区CPG15蛋白表达最高，且rPAF-AH组7d缺血区CPG15蛋白表达明显高于生理盐水组（P<0.01）。　　结论：　　rPAF-AH能够上调局灶性脑缺血大鼠缺血区CPG15蛋白及mRNA表达水 第二章 重组血小板活化因子乙酰水解酶对局灶性脑缺血大鼠候选可塑性相关基因15蛋白及基因表达的影响　　目的：　　探讨重组人血小板活化因子乙酰水解酶（rPAF-AH）对局灶性脑缺血大鼠缺血区候选可塑性相关基因15（CPG15）蛋白及基因表达的影响。　　方法：　　选择SD大鼠45只，随机分为生理盐水组、rPAF-AH组、假手术组，每组15只，前2组建立大脑中动脉栓塞模型，假手术组大鼠除未进行颈总动脉剪开、线栓置入及颈总动脉结扎缝合，余与生理盐水组和rPAF-AH组操作相同。给药方式利用大鼠脑立体定位仪进行，于前囟后0.8～1.0mm，头尾正中线左侧旁开1.8～2.0mm，深度4.0～5.0mm，进行左侧侧脑室埋管。rPAF-AH组制模后即刻开始侧脑室注入rPAF-AH，剂量为50μg/（kg.d）20μl，生理盐水组实验开始后侧脑室注入生理盐水20μl/d。每组再分为2、7、14d3个时间点，每个时间点5只大鼠处死取脑组织用于实验，运用Western-blot法及实时定量PCR技术检测CPG15蛋白及mRNA表达水平。　　结果：　　（1）生理盐水组和rPAF-AH组2、7、14d缺血区CPG15 mRNA表达明显高于假手术组，均有统计学差异（P<0.01），7d缺血区CPG15 mRNA表达最高，且rPAF-AH组7d缺血区CPG15表达高于生理盐水组（P<0.05）。　　（2）生理盐水组和rPAF-AH组2、7、14d缺血区CPG15蛋白表达明显高于假手术组，均有统计学差异（P<0.01），7d缺血区CPG15蛋白表达最高，且rPAF-AH组7d缺血区CPG15蛋白表达明显高于生理盐水组（P<0.01）。　　结论：　　rPAF-AH能够上调局灶性脑缺血大鼠缺血区CPG15蛋白及mRNA表达水 平。