一、研究目的本课题旨在建立缺血性中风气虚血瘀证的动物模型,并在此模型的基础上对补阳还五汤新型中药复方颗粒进行药效作用的研究。通过观察药物对大鼠血液流变学指标、凝血四项指标、血小板聚集率、诱生型一氧化氮合成酶活力、睫状神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子含量以及大脑海马区神经元形态和结构的影响,比较补阳还五汤新型中药复方颗粒与原方汤剂以及脑心通胶囊的治疗效果。同时利用昆明小鼠进行三批次的急性毒性实验,为该复方的开发和临床应用奠定理论基础。二、研究方法(一)模型建立120只SD大鼠,SPF级,雄性,体重100±20g,随机抽取8只作为正常对照组,给予普通饲料喂养,其余大鼠给予高脂高糖饲料。喂养30天后,所有大鼠称量体重,高脂高糖饲料喂养的大鼠采用Pulsinelli四血管闭塞法制备全脑缺血模型。(二)药效评价成模大鼠随机分成模型组、补阳还五汤复方颗粒组、补阳还五汤汤剂组、脑心通阳性药对照组,并设正常对照组和假手术组(除不凝闭椎动脉和不夹闭颈总动脉外,其余操作与模型组相同)。连续给药21天后,各组大鼠于腹主动脉取血,肝素钠抗凝后分离血浆,全自动血液流变仪检测血浆全血粘度(高切、中切、低切)、全血还原粘度(高切、中切、低切)、红细胞聚集指数、红细胞电泳时间、红细胞变形指数；枸橼酸钠抗凝后分离血浆,全自动凝血分析仪检测血浆凝血酶原时间、国际标准化比率、活化部分凝血酶原时间、血浆纤维蛋白原,血小板聚集测试仪检测大鼠血浆的血小板最大聚集率；分离血清,紫外分光光度计检测血清一氧化氮合成酶的活力。处死大鼠后断头取部分大脑制备病理切片,其余大脑制备组织匀浆液,紫外分光光度计检测脑组织中一氧化氮合成酶的活力；ELISA法测定脑组织中睫状神经营养因子和胶质细胞源性神经营养因子的含量。(三)急毒实验KM小鼠60只／批,一共3批,SPF级,雌雄各半,体重20±2g,各批小鼠给予不同剂量的补阳还五汤新型中药复方颗粒,给药期间观察小鼠的情况并记录体重增长以及进食量,7天后处死小鼠,取心脏、肝脏、脾脏、肾、胸腺、大脑,称量湿重并计算脏器指数。三、研究结果(一)缺血性中风气虚血瘀证大鼠模型的建立运用高脂高糖饲料喂养结合Pulsinelli四血管闭塞法制备动物模型,该模型能模拟出精神萎靡、汗出、腹泻、口唇发紫、肢体麻木等缺血性中风气虚血瘀证的临床症状。与正常组比较,模型组大鼠的血液流变学、凝血四项、血小板聚集率各相关指标均出现显著性异常,大脑海马区神经元出现坏死、固缩的现象,符合临床上缺血性中风患者的病理体征。因此,该法能成功建立缺血性中风气虚血瘀证大鼠模型。(二)补阳还五汤新型中药复方颗粒的药效评价补阳还五新型中药复方颗粒能够显著降低高、中、低切变率下SD大鼠的全血黏度和全血还原粘度、降低红细胞的聚集性、缩短其电泳时间以及改善红细胞的变形性,提高血浆凝血酶原时间和国际标准化比率,降低血小板聚集率,抑制血清和脑组织中一氧化氮合成酶的活性,增加大脑睫状神经营养因子和胶质细胞源神经营养因子的含量,改善海马区神经元的病理形态结构,其效果与阳性药脑心通接近且优于传统汤剂。(三)补阳还五汤新型中药复方颗粒的急性毒性研究小鼠对补阳还五汤新型中药复方颗粒的最大耐受量至少为最高累积日剂量35.59g/kg,相当于成人日剂量的152倍。与空白组比较,给药组小鼠的心指数、肝脏指数、脾脏指数、肾脏指数、胸腺指数、脑指数均无显著性差异,提示该复方颗粒无明显的靶脏器毒害作用,安全范围较大。四、结论本实验能够成功建立证型结合的缺血性中风气虚血瘀证动物模型。补阳还五汤新型中药复方颗粒能够改善血液流变学、凝血系统、血小板聚集性等相关指标,降低-氧化氮合成酶的活力以及增加大脑神经营养因子的含量。并且该复方颗粒急性毒性很小,用药安全,可供进一步临床前研究。