目的：研究PNP基因的克隆、真核表达载体的构建与鉴定，为肿瘤的基因治疗与基因工程的应用提供实验和理论依据。 方法： ①大肠埃希氏杆菌K12 PNP基因的PCR扩增。 ②重组质粒pMSCV-PNP的构建。 ③用氯化钙法制备感受态大肠杆菌(XL1-Blue)。 ④转化感受态菌：用携带目的基因的重组质粒pMSCV-PNP转化感受态XL1-Blue大肠杆菌，同时设立阳性对照组和阴性对照组。转移适量转化菌于平皿培养，筛选氨苄青霉素抗性转化菌落。 ⑤提取质粒和酶切重组质粒：提取重组质粒pMSCV-PNP，限制性内切酶EcoR Ⅰ和Bgl Ⅱ双酶切重组质粒，电泳鉴定。 ⑥PCR鉴定、测序鉴定重组质粒pMSCV-PNP;⑦提取质粒和酶切质粒：限制性内切酶BspH Ⅰ、Bgl Ⅱ、Afl Ⅱ分别酶切pVSV-G，pGAG-POL，pMSCV，电泳鉴定质粒。 结果： ①PNP基因PCR扩增出特异条带。 ②重组质粒pMSCV-PNP电泳结果与预期一致。 ③重组质粒pMSCV-PNP转化结果：实验组平皿上可见近百个菌落，阳性对照组有数百个菌落生长，而阴性对照组则未见菌落生长。 ④阳性克隆质粒pMSCV-PNP PCR鉴定、酶切鉴定，电泳条带与预期一致；测序结果正常。 ⑤克隆质粒pVSV-G，pGAG-POL，pMSCV酶切鉴定与预期一致。 结论： ①从大肠埃希氏杆菌K12中克隆到PNP基因。 ②构建了表达载体pMSCV-PNP。 ③抽提了三种载体质粒pMSCV、pVSV-G、pGAG-POL。