马泰勒虫病是马泰勒虫寄生于马、骡、驴和斑马等动物的红细胞内及网状内皮系统引起的原虫血液病。该病经硬蜱传播,临床症状表现为贫血、高热、黄疸等,多呈急性经过,死亡率和发病率均很高。我国将其列为二类疫病,OIE将该病列为B类疫病。该病全球性流行,严重影响全球马的健康,尤其危害马驹、纯种马以及引进马种,严重影响马产业的健康发展。现阶段证实传播马泰勒虫病的蜱有3属17种,我国已证实有镰形扇头蜱、草原革蜱、银盾革蜱、森林革蜱等媒介。新疆省区草原面积大、区系复杂,硬蜱孳生数量较多,其诊断和防治技术滞后等,导致蜱传马泰勒虫病流行严重,对地方马产业影响极大,同时对该病蜱传媒介效能尚未有较详细的研究。因此,新型检测技术(包括血清学诊断用抗原蛋白功能研究)和传播媒介效能研究显得尤为重要。本文研究对象为地方流行虫株和当地传播宿主硬蜱,借助分子生物学的方法,研究马泰勒虫间接ELISA所用抗原蛋白(EMA3)功能和边缘革蜱媒介效能等,对本病的早期诊断、防止媒介蜱等综合防控奠定技术支撑,从而降低或消除该病的感染、发病,促进马产业的健康发展。(1)本试验基于18S r RNA基因的特异性引物,经PCR方法对所采集的新疆478份疑似马血样进行马泰勒虫的检测、筛选阳性,经SPSS20.0统计,根据18S r RNA基因采用最大似然法(ML)绘制其进化树。试验结果:发现马泰勒虫总阳性率为22.38%(107/478),成功分离获得了马泰勒虫的昭苏流行株(Te-zh);分析统计发现阿勒泰与和静、昭苏与和静分别存在显著性差异(P=0.012<0.05;P=0.007<0.05),感染年龄段之间无显著性差异(P>0.05);扩增的阿勒泰、托克逊马泰勒虫基因与瑞士地方株(KM046918.1)同源性为100%。此次试验为我区马泰勒虫的流行因素及其分类地位提供了数据支撑。(2)本试验基于(1)试验分离的地方流行虫株进行研究,将马泰勒虫抗原蛋白家族的EMA3基因序列克隆于原核表达载体PET-32a构建质粒,转化至Rosetta感受态细胞。通过IPTG诱导EMA3重组蛋白表达,用KCL法切目的条带纯化。结果显示,构建的PET-32a-EMA3重组质粒;克隆得到了36 k Da目的蛋白,His-EMA3蛋白与预期结果相符;经WB证明EMA3蛋白具有一定的生物活性。(3)本文在(1)试验研究基础上,采集试验点的马体表吸血的硬蜱1869只,雌蜱1148只(饱血蜱232只,未饱血蜱916只),雄蜱721只;通过分子生物学、形态学方法,对所采集的硬蜱进行种属鉴定;为了揭示蜱传马泰勒虫病的媒介效能,运用q PCR方法进行了媒介效能研究。结果显示,1869只硬蜱中,鉴定出725只为边缘革蜱;725只蜱样品中检出40只为携带马泰勒虫病原;其感染潜能为5.51(40/725)。饱血雌蜱、未饱血雌蜱、雄蜱的感染潜能分别为8.33(8/96)、5.52(20/362)、4.49(12/267)。对其子一代的成蜱、若蜱、幼蜱、卵、若进行q PCR病原检测,均未检测到病原,表明边缘革蜱不能经卵传播,即不能垂直传播马泰勒虫;本次试验首次在国内证实了边缘革蜱携带有马泰勒虫,对蜱传疫病的防控提供基础数据。