目的:巨核细胞成熟分化与血小板相关疾病的发生密切相关,转录因子在巨核细胞成熟分化中起着非常重要的作用。先前已有研究表明在小鼠的巨核细胞分化过程中转录因子MKL-1的表达上调。在巨核细胞成熟分化过程中NFATC1是参与调控的又一重要转录因子。目前对转录因子MKL-1及NFATC1如何影响巨核细胞发育的具体分子机制不清楚。本研究旨在找到亟待解决的与巨核细胞成熟分化相关疾病的基础理论的突破点,将从细胞水平和分子水平探讨LncRNA CASC2和hsa-miR-124-3p调控MKL-1与NFATC1的相互作用及其信号通路进而影响巨核细胞成熟分化的作用及机制。方法:本论文使用RNAi技术构建稳定敲降内源基因的巨核细胞系;利用qPCR技术结合免疫印迹实验检测目的基因的mRNA水平和蛋白水平;利用荧光素酶活性实验检测目的基因对荧光素酶报告基因质粒的转录活性的影响;利用染色质免疫共沉淀技术分析MKL-1与巨核细胞成熟分化标记基因启动子的结合情况;通过免疫荧光共定位技术检测MKL-1、NFATC1在巨核细胞中的分布;利用截短突变技术和蛋白免疫共沉淀技术及检测MKL-1、NFATC1蛋白的相互作用的区域;利用RNA IP实验检测目的蛋白与hsa-mi R-124-3p的结合情况;使用吉姆萨染色分析巨核细胞的形态与数目;流式细胞术分析巨核细胞的DNA倍型及检测凋亡率;利用CCK-8技术检测目的基因的表达对巨核细胞增殖的影响。通过上述实验技术从细胞水平和分子水平证明LncRNA CASC2、hsa-miR-124-3p、MKL-1和NFATC1的在巨核细胞成熟分化的作用及机制。结果:通过上述研究得到以下结果:1:干扰内源性的MKL-1和阻断RhoA-MKL-1信号通路可以显著降低巨核细胞成熟分化标记基因的转录与表达,进而影响巨核细胞的成熟分化。MKL-1通过结合到巨核细胞成熟分化标记基因CD41/CD61/C-KIT启动子的CAr G box上促进其转录与表达。而NFATC1能够促进巨核细胞的增殖。2:MKL-1与NFATC1共定位于巨核细胞核中且存在直接的蛋白与蛋白相互作用;NFATC1抑制MKL-1的入核,促进MKL-1核转出。MKL-1不影响NFATC1的转录水平,但是抑制NFATC1的蛋白水平;MKL-1与NFATC1相互作用削弱MKL-1-SRF结合到CD41/CD61/C-KIT启动子的CArG box的能力;MAPK1磷酸化NFATC1进而影响巨核细胞的成熟分化。3:Hsa-miR-124-3p抑制巨核细胞的增殖。Hsa-mi R-124-3p结合到NFATC1和MAPK1启动子的3’UTR上抑制NFATC1和MAPK1的表达。MKL-1通过结合到hsa-miR-124-3p启动子的CArG box上促进hsa-miR-124-3p启动子的转录激活。4:在巨核细胞系中LncRNA CASC2的表达与hsa-mi R-124负相关。LncRNA CASC2促进巨核细胞成熟分化标记基因CD41/CD61/C-KIT的转录与表达。LncRNA CASC2与hsa-miR-124-3p结合发挥海绵作用抑制hsa-miR-124-3p的功能。hsa-miR-124-3p抑制Lnc RNA CASC2的表达。MKL-1通过结合到LncRNA CASC2启动子的CAr G box上促进LncRNA CASC2的转录激活。结论:本论文证明了Lnc RNA CASC2/mi R-124-3p/MKL-1/NFATC1反馈环路调控巨核细胞的成熟分化,为巨核细胞成熟分化异常的相关疾病提供了理论支撑。