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背景：流感作为一种危害严重的传染病,在全世界广泛流行。其中甲型流感病毒以高易感性,快传播性,严重威胁着社会公共卫生安全。流感疫苗是目前预防流感病毒感染的最有效方法。然而目前研发上市的流感减毒活疫苗不能与最新变异的流感病毒抗原密切匹配,因此不具有最佳保护功效。MicroRNA (miRNA)介导的基因沉默技术为新型流感疫苗的研发提供了新思路。本课题组前期以南京2009甲型H1N1流感病毒株(A/Nanjing/108/2009H1N1)为背景株,在反向遗传学的基础上通过碱基突变将miRNA let-7b(let-7b)的结合靶位装载进病毒PB1基因片段,成功构建let-7b介导甲型流感病毒减毒株,并在体外实验中证实其复制能力下降。然而病毒是否成功减毒最终需要体内试验进行验证,即证实减毒病毒株在动物体内是安全的。临床前动物试验检测减毒病毒毒力是获得安全疫苗的第一步,也是关键一步。本项研究旨在验证let-7b介导的甲型流感减毒株(miRT-H1N1)在小鼠体内是安全的。方法：经鼻滴入107TCID50～103TCID505个稀释度病毒miRT-H1N1、wild type (wt)-H1N1和scramble (scbl)-H1N1构建小鼠模型；连续14天监测小鼠体重变化,记录生存率,计算半数致死量。随机选取另一批小鼠经鼻滴入105TCID50稀释度病毒,分别于感染后第3、5、8、10、14天取肺脏组织;观察比较感染不同病毒组小鼠的肺脏损伤程度,比较不同病毒株在肺脏组织的复制差异,包括检测病毒滴度和病毒核酸复制水平。检测肺组织IL-6、TNF-α及IFN-β的表达水平,评估炎症反应程度。结果：接种miRT-H1N1的小鼠体重下降不明显(下降<10%),生存率为100%,即使接种最高剂量(LD50>107 TCID50)也不会引起小鼠死亡；肺脏组织中miRT-H1N1病毒复制明显受限,病毒载量与wt-H1N1和scbl-H1N1相比下降超过100倍。除此之外,感染miRT-H1N1的小鼠肺脏组织损伤最轻,促炎因子和趋化因子表达水平显著下降,炎症反应显著减轻。结论：miRT-H1N1的毒力在小鼠肺脏组织中显著减弱,这表明miRT-H1N1在小鼠体内是安全的。miRNA介导的基因沉默技术为减毒疫苗的构建提供了一种可供选择的途径。