稠李子多酚的提取、纯化及抗氧化活性研究

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在我国东北的长白山、大兴安岭地区,稠李子是十分常见的一种野生植物资源。其味苦涩,大多稠李子果实成熟后无人摘采,十分浪费。稠李子果实中含有大量多酚类物质,其多酚含量远高于其它常见的果蔬。多酚类物质有显著的抗氧化能力、抗癌作用、清除自由基作用,这与现代人的健康息息相关。但由于稠李子产地受限、运输过程中果实不易贮存、多酚类物质的活性容易丧失等原因,如何将稠李子多酚进行提取、纯化就有很重要的研究价值。本试验采用大兴安岭地区采摘的野生稠李子作为原料,在单因素实验的前提下,运用响应面法优化超声辅波助提取法对其多酚的提取工艺进行了探究;选取不同的大孔树脂,针对各种不同树脂对其多酚的吸附解吸特质,进行了对比,进而找到最佳的纯化方法;经过体内与体外的抗氧化性实验,对其多酚的抗氧化性进行评价,为稠李子多酚的功能性食品的研究与加工提供了参考原理。具体研究结论如下:(1)探究超声波辅助法提取稠李子多酚的最佳工艺条件在单因素试验的前提下,选取液料比、提取溶剂浓度、超声功率、超生时间为变量,多酚提取的量为响应值,通过四因素三水平的响应面实验对超声辅助法提取稠李子多酚的提取工艺参数进行优化。最终优化后的提取工艺条件为:液料比为15:1,乙醇浓度为52%,超声功率为550 W,超声时间43 min,稠李子多酚提取量为(6.23±0.18)mg/g。(2)大孔树脂的筛选与最佳纯化条件的确定挑选3种不同型号的树脂,筛选出对稠李子多酚纯化效果最优的树脂,对其进行静态吸附-解吸试验,动态吸附-解吸试验。试验结果表明AB-8型号大孔树脂的吸附率为79.89%,解吸率为84.09%,在三种树脂中吸附解吸能力最好。AB-8大孔树脂吸附稠李子多酚类物质是放热反应,吸附过程符合Langmuir等温吸附模型和Freundlich等温吸附模型,并且拟合度较好。AB-8大孔树脂纯化稠李子多酚的最佳条件为上柱液质量浓度7.07mg/mL,吸附平衡时间4h,解吸平衡时间2h,上样液的pH值4,洗脱剂乙醇的浓度为70%,上柱液的吸附流速为2BV/h,洗脱剂的解吸流速为2BV/h,在此条件下多酚的纯度可由粗提物的11.28%提高至73.79%,经冻干后得到黑紫色的粉末为稠李子多酚精提物。(3)稠李子多酚体外抗氧化性的评价由超声波辅助法提取的稠李子粗多酚经过纯化后,进行总还原力的测定、对·OH羟基自由基的清除作用的测定以及ABTS自由基清除能力的测定,DPPH自由基清除能力的测定,同时用维生素C(Vc)作为参照物进行对比。结果表明稠李子多酚的浓度与其抗氧化能力在这四种抗氧化性体系中均呈正相关。当Vc与稠李子多酚溶液浓度为0.5mg/mL时,稠李子多酚的DPPH清除率为74.28%,Vc的清除率为98.82%,稠李子多酚的DPPH自由基清除率为Vc的75.17%;当溶液浓度为1.0mg/mL时,稠李子多酚与Vc的ABTS自由基清除率分别为96.51%与98.88%相差不多;当溶液浓度为0.5mg/mL时,Vc与稠李子多酚对羟基自由基的清除率分别为95.36%与28.91%;在溶液浓度为1.0mg/mL时,多酚的还原力(0.701)是Vc(1.826)的38.39%;结果表明稠李子多酚在四种抗氧化体系中都有较好清除作用,但其抗氧化能力还是弱于Vc。(4)稠李子多酚在小鼠体内抗氧化活性的探究通过对乙醇急性肝损伤模型小鼠灌胃纯化后的稠李子多酚提取物,测定肝脏中的SOD活性、MDA含量、CAT活性、GSH-PX活性来确定稠李子多酚提取物的抗氧化能力。结果表明,剂量组小鼠的肝脏中超氧化物歧化酶有显著的提高(P<0.05)、过氧化氢酶活性有显著的上升(P<0.05)、丙二醛的含量有显著的下降(P<0.05)、谷胱甘肽过氧化物酶有着显著的上升(P<0.05),说明稠李子多酚提取物可以有效的提高乙醇急性肝损伤模型小鼠的抗氧化能力。
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