研究背景:卵巢癌严重威胁女性健康甚至生命,发病率和致死率较高。卵巢癌化疗是以铂类药物为基础的联合化疗,而化疗药物的副作用和耐药性是亟需解决的科学问题。天然植物水果提取物安全低毒,并具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等生物活性,运用前景广泛。蜜橘黄素是从蜜橘中提取的活性成分,具有显著的抗肿瘤活性,但其抗肿瘤机制尚不明确。本研究分析蜜橘黄素对卵巢癌细胞凋亡、焦亡和自噬的影响,阐明蜜橘黄素对卵巢癌的抗肿瘤效应及其作用机制,为蜜橘黄素在卵巢癌治疗中奠定基础。研究目的:1.评估蜜橘黄素对卵巢癌细胞凋亡的影响;2.评估蜜橘黄素对卵巢癌细胞焦亡的影响;3.评估蜜橘黄素对卵巢癌细胞自噬的影响;4.探讨ROS、自噬和焦亡的关联机制。研究方法:1.CCK-8和Live/Dead实验评估蜜橘黄素对卵巢癌细胞生长、增殖和死亡的效果;ROS和JC-1染色评估蜜橘黄素对卵巢癌细胞ROS产生和线粒体膜电位的影响。凋亡流式分析、Hoechst染色和蛋白印迹技术检测蜜橘黄素对卵巢癌细胞凋亡的影响。2.电子显微镜、qPCR和蛋白印迹技术评估蜜橘黄素对卵巢癌细胞焦亡的影响。3.透射电子显微镜、MDC染色、蛋白印迹和免疫荧光技术研究蜜橘黄素对卵巢癌细胞自噬和线粒体自噬的影响。4.使用3-MA、NAC和NSA研究ROS、自噬和焦亡之间的关联机制。研究结果:1.CCK-8和Live/Dead结果表明蜜橘黄素抑制卵巢癌细胞的生长和增殖,并促进细胞死亡。ROS和JC-1染色表明蜜橘黄素诱导ROS产生和线粒体膜电位下降。Hoechst染色、蛋白印迹和凋亡流式分析表明,蜜橘黄素促进诱导卵巢癌细胞核呈致密浓染、c-PARP和yH2AX的蛋白表达和细胞凋亡。2.结果表明焦亡细胞呈球形囊状并肿胀,c-GSDMD和c-GSDME的表达量逐渐升高,IL-1β和ASC的mRNA的表达量同样也升高。3.透射电子显微镜观察到自噬小体和线粒体自噬小体;免疫荧光结果表明LC3-II的表达增加、线粒体形态发生肿胀、溶酶体和线粒体共定位的增多;MDC染色显示嗜酸性自噬小体的增多,蛋白印迹表明自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62的表达量增高。4.使用NAC,ROS产生减少,c-GSDMD、c-GSDME和LC3-Ⅱ的蛋白表达被抑制;使用3-MA,LC3-Ⅱ的表达被抑制,c-GSDMD和c-GSDME同样被抑制;使用NSA,c-GSDMD蛋白的表达被抑制,LC3-Ⅱ的表达亦被抑制。结论:1.蜜橘黄素可抑制细胞生长和增殖并促进其死亡,促进ROS产生和降低线粒体膜电位,诱导卵巢癌细胞的凋亡。2.蜜橘黄素诱导卵巢癌细胞焦亡。3.蜜橘黄素诱导卵巢癌细胞自噬及线粒体自噬。4.蜜橘黄素通过调控ROS来诱导卵巢癌细胞自噬和焦亡。