据WHO统计，发达国家每年约有三分之一的人感染食源性疾病，美国每年的食源性疾病多达7600万例。而在一些发展中国家，食源性疾病往往是导致人非正常死亡的主要原因。单增李斯特菌作为一种重要的食源性致病菌和人畜共患病的致病菌，发病率虽然较低，但致死率高达20％～30％，对免疫缺陷病人甚至高达70％。其危害程度甚至超过了沙门氏菌。　　除单增李斯特菌外，其它李斯特菌对人类也有一定的致病性。因此，食品中任何一种李斯特菌的存在，均被认为是卫生状况不良的标志。虽然传统的细菌培养法是目前微生物鉴定的标准方法，然而该方法操作繁琐、检测周期长（通常5-7天），因此需要建立高通量、快速、灵敏的李斯特菌的检验方法。　　实时荧光定量PCR技术结合了DNA探针杂交技术的高特异性、PCR的高灵敏性和光谱技术的高精确性，能快速、准确的检测多种致病菌。生物芯片检测技术则通过偶联抗体检测食品中的致病菌，具有高通量、快速、准确、可靠的特点，能够实现对组群样品、多目标的同时检测，极大的提高检测效率。而抗体的特异性就是关键制约因素。　　本研究包含两部分:试验一通过建立李斯特菌属单重荧光定量PCR检测方法和单增李斯特菌双重荧光定量PCR检测方法，为食品卫生行业提供了特异、快速、定量准确的同步检测李斯特菌属的方法;试验二制备高效价高特异性单增李斯特菌单克隆抗体，为建立生物芯片快速检测方法奠定基础。　　试验一以单增李斯特菌的Hly基因和李斯特菌属的23SrDNA基因作为靶因，分别设计一对引物和一条探针，通过目的片段的扩增、PCR产物回收、PCR产物连接、质粒载体转化、重组质粒的构建、重组质粒的鉴定等步骤制备了阳性标准品。以阳性质粒为模板，在经过优化的反应体系和条件的基础上，分别建立了单增李斯特菌和李斯特菌属的单重荧光定量PCR方法，并分析了其特异性、敏感性和重复性。特异性结果显示，建立的荧光定量PCR方法具有很好的特异性。敏感性结果显示，建立的单增李斯特菌和李斯特菌属的标准曲线相关系数分别为0.965和0.971，检出限分别为18.6和23.2（拷贝/μL）。重复性试验结果显示，建立的单增李斯特菌和李斯特菌属荧光定量PCR方法的变异系数均小于2％。　　在单重荧光定量PCR方法的基础上，建立了单增李斯特菌双重荧光定量PCR方法，并分析了其敏感性。结果显示，两条标准曲线的的相关系数分别为0.9861和0.9967，检出限分别为18.6和23.2(拷贝/μL)。　　采用建立的李斯特菌属荧光定量PCR方法对进出口各类报检的肉类样品198份进行检测，并通过与国标法（生化鉴定）作对照。结果显示，该方法的检测结果与国标方法一致。　　试验二以灭活的单增李斯特菌为抗原(5×107cfu/mL)，与等体积的佐剂混合免疫雌性BALB/c小鼠，间隔2周免疫一次，经过5次免疫，用建立的间接ELISA法筛选出血清效价超过1∶10000的小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，筛选和克隆阳性杂交瘤细胞，将得到的单克隆抗体进行抗体亚类的鉴定和特异性分析，最后制备小鼠腹水单抗和进行单抗纯化。结果筛选出1E3、2B5、3G5三株杂交瘤细胞，抗体类型均IgG1型，腹水抗体效价均达到1∶160000，但在特异性结果显示，三株杂交瘤细胞均能与李斯特菌属内的细菌和金黄色葡萄球菌有一交定的叉反应，特异性不强。　　通过对间接ELISA法反应条件的摸索，优化了各组分的最适工作条件。结果表明，抗原的最佳包被条件为37℃包被2h;酶标二抗的最佳浓度为1000倍稀释;抗原封闭时间为2h;抗原与一抗作用时间为1h;抗体和酶标二抗作用时间为1h。　　本研究成功建立了特异、快速、定量准确的同步检测李斯特菌属的荧光定量PCR　　方法。　　本研究制备了3株高效价的单增李斯特菌的单克隆抗体，但均与李斯特菌属内和金黄色葡萄球菌有交叉反应，其特异性有待提高，对其存在的问题做了一定探讨，对推动单增李斯特菌单克隆抗体的发展具有重要意义。