论文部分内容阅读
无患子(Sapindus mukurossi),又名肥皂树,是落叶乔木,主要靠种子播种繁殖,但其种皮坚硬,蛀虫率高,而且出苗不整齐,周期长,严重限制了无患子的自然更新和产业化应用。组织培养能够弥补种子繁殖的不足,减少对外界自然环境的依赖程度,不仅能保持母株优良特性不变,而且繁殖速度快,繁殖系数高,可降低生产成本,满足大规模种植无患子的需求,为开发无患子的科研价值奠定了深厚的基础。本文在系统地了解了无患子国内外植株研究现状及总结前人研究工作的基础上,以无患子的优良品种作为外植体材料,对无患子离体快繁体系中各阶段的主要影响因素和最佳培养基配方进行探讨研究,从而建立高效稳定的无患子组织培养技术体系,为无患子的规模化育苗提供一条有效途径,为无患子苗木的工厂化生产及应用奠定基础。本研究的主要成果如下:(1)通过外植体灭菌试验的结果可知,最好的消毒方法是先用75%酒精消毒10s,然后用0.1%HgCl2消毒8min,最后用2%NaClO消毒5min,此时的污染率最低,褐化率也最低,成活率最高。(2)愈伤组织诱导以MS+2,4-D2.0mg·L-1+IBA0.1mg·L-1为最佳培养基组合,诱导效果最好。当IBA浓度不变,2,4-D浓度升高,愈伤组织的诱导率也随着升高,平均启动时间也越快,诱导出的愈伤组织质量也越来越高;当2,4-D浓度不变时,高浓度的IBA对愈伤组织的诱导有明显的抑制作用,平均启动时间也越来越慢,愈伤组织会变成白色的疏松状,质量明显下降。(3)通过两种不同的外植体对比试验,可知新生顶芽的出芽率明显优于带腋芽的茎段。新生顶芽接入培养基后,生长较快,芽体粗壮嫩绿;带腋芽的茎段在接入培养基的初期,腋芽萌发速度较慢,芽体细长瘦弱,茎段切口处有大量的愈伤组织生成。(4)外植体直接诱导不定芽的最佳培养基为MS+NAA0.2mg·L-1+IBA0.05mg·L-1+6-BA3.0mg·L-1,萌芽率最高,达94.01%;通过极差和方差分析可知,各因素对无患子芽诱导影响的主次关系为:NAA>6-BA>IBA;NAA和6-BA对芽体启动培养的影响都达到了显著水平。(5)愈伤组织诱导芽的最佳培养基组合为MS+NAA0.05mg·L-1+6-BA2.5mg·L-1+KT0.5mg·L-1,愈伤组织分化出深绿色的芽体最多,且长势最好;根据极差R值所得,上述3个因子对愈伤组织诱导芽影响的主次关系为:NAA>6-BA>KT.且NAA对愈伤组织诱导芽有极显著性影响(P值=0.0074)。(6)在继代增殖培养中,9种不同激素配比的培养基增殖系数差异性极显著(p<0.01),其中处理5的增殖系数极显著的高于其他处理,达4.20,且没有愈伤组织形成,芽体最健壮,苗的长势也最好,因此处理5:IBA0.02mg·L-1+6-BA1.0mg·L-1为增殖培养中最优的激素配比组合。相同浓度的IBA,在不同浓度的6-BA作用下,其增殖系数出现先上升后下降的趋势,因此高浓度的6-BA对不定芽增殖培养有抑制作用。当6-BA浓度一定时,和高浓度的IBA组合,基部会出现少量的愈伤组织,由此可以判断,高浓度的IBA会促使不定芽在增殖培养中形成愈伤组织,抑制不定芽的发生。(7)通过壮苗培养试验可知,MS+NAA0.1mg·L-1+GA30.1mg·L-1处理下的组培苗长势最差,MS+NAA0.5mg·L-1+GA30.3mg·L-1处理下的组培苗生长最好,叶多浓绿,说明高浓度的NAA和GA3对组培苗的生长较好,苗较粗壮。(8)在探讨不同的植物生长调节剂对生根培养的影响试验中,1/2MS+IBA0.5mg·L-1+NAA0.1mg.L-1的生根率最高,为80.47%,是生根培养最适宜的培养基。IBA和NAA配合使用比单独使用IBA效果要好;但高浓度的IBA会抑制根的发生。(9)不同的生根促进剂对生根培养也有显著的影响,ABT1和GGR6对无患子的生根诱导上起到了极显著性影响,各浓度均可在不同程度诱导生根。其中处理I2:1/2MS+ABT12.0mg·L-1生根率最高,达77.67%,根最多,且生长最好。在1.0-4.0mg.L-1范围内,随着ABT1浓度的增加,无患子组培苗生根率呈现出先增加后降低的趋势;随着GGR6浓度的增加,生根率呈现出下降的趋势。由此可知,当生根促进剂浓度过高时,会抑制生根的效果。(10)从炼苗方案的试验结果可以看出,最佳的炼苗方式为闭瓶锻炼4d,开瓶锻炼3d,其平均成活率可达84.46%。而只经过开瓶锻炼或只经过闭瓶锻炼的试验组,其成活率均较低。由此可以得到以下几个结论:①炼苗过程对组培苗的移栽成活率有重要影响,经过炼苗处理的平均成活率显著高于不炼苗的组培苗;②炼苗时间的长短对试管苗移栽成活率有着极显著的影响;③闭瓶锻炼和开瓶锻炼两个过程均必不可少,缺少其中一个阶段都将降低移栽成活率。(11)在移栽时,不同的基质类型对无患子小苗的成活率有显著性影响,小苗的生长状况也有很大的差异。试验结果表明,泥炭土:珍珠岩:河沙=1:1:1的成活率极显著的高于其他基质类型,达到83.27%,小苗健壮,叶色深绿,生长最好。