【摘 要】
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目的 本文采用一种新型亲和免疫组织化学染色技术—生物素-链酶亲和素(Biotin-Streptavidin,BSA)系统,检测188份各型乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中T淋巴细胞亚群(CD3+、CD
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目的 本文采用一种新型亲和免疫组织化学染色技术—生物素-链酶亲和素(Biotin-Streptavidin,BSA)系统,检测188份各型乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD+(25)+)的百分比,以期进一步探讨乙型病毒性肝炎的发病机制,T淋巴细胞亚群表达水平变化在乙型肝炎中的意义,及BSA技术在T细胞亚群测定方面的临床应用价值。 方法 采用聚蔗糖—泛影葡胺(Ficoll)分离液密度梯度离心法直接从新鲜肝素抗凝血中分离PBMC,以含有10%小牛血清的RPMI-1640培养液重悬PBMC,并调整其浓度为大约2×106/ml,取10μl,以BSA法测定T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD25+)的百分比。另取0.5ml置24孔培养板,用植物血凝素(PHA)作为刺激原,加0.5ml PRMI-1640完全培养液,于37℃含5%的CO2培养箱孵育培养48h,收集细胞,调成浓度约为2×106/ml,再用BSA法测定CD25+的浓度。再以PCR法测定PBMC内HBV DNA的感染率。 结果 实验结果显示:与正常对照相比,乙肝病人PBMC中T淋巴细胞亚群表达水平CD3+、CD4+降低,CD8+升高,CD4+/CD8+比值降低,CD25表达水平在PHA诱导前后均降低,差异有显著意义(P<0.01);另外,乙肝病人PBMC中HBV-DNA(+)病人与PBMC内HBV-DNA(-)病人相比,CD25表达水平亦存在较大差异(P<0.01)。 结论 乙肝病人体内存在明显的细胞免疫功能紊乱,表现为T细胞亚群的表达水平降低及其比例失衡,T细胞活化障碍,并与肝病的慢性化相关;BSA也是一种测定T细胞亚群的简便易行而有效的方法。
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