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目的:吡咯里西啶生物碱（pyrrolizidine alkaloids,PAs）广泛分布于全世界3%的开花植物中,是一种具有肝毒性的天然成分。含PAs的中草药或被PAs污染的食物在我国仍然被广泛使用,产妇摄入后会导致乳汁被污染,使婴幼儿也暴露于PAs中。早期病例提示,哺乳期倒千里光碱（retrorsine,RTS）暴露可导致幼年子代脂肪肝,但脂肪肝是否能持续至成年尚不清楚。本课题将以RTS作为PAs的代表药物,探究哺乳期母鼠RTS暴露致成年子代脂肪肝发生的编程效应。方法:Wistar大鼠出生后1-3周（postnatal week,PW）,母鼠灌胃给予5或20 mg/kg·d的RTS（RTS5和RTS20组）,对照组给予相同体积的溶媒,哺乳期结束前1天收集乳汁,哺乳期结束后（PW4第一天）收集部分子代血和肝脏,其余子代正常饲养至PW12收集血和肝脏。苏木素-伊红（H＆E,hematoxylin-eosin）和油红O染色观察肝脏组织病理学改变。UHPLC-QE Orbitrap/MS方法对乳汁成分进行代谢组学分析。LC-MS/MS法检测乳汁、血液以及肝脏中RTS原型药物以及代谢产物的含量。生化试剂盒检测子代大鼠血清肝功能相关指标以及肝脏中脂质水平。实时定量PCR检测子代大鼠肝脏脂肪酸摄取、合成、β-氧化和外排相关基因以及与孕烷X受体（pregnane X receptor,PXR）激活相关基因的表达改变。染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay,ChIP）检测PW12子代PXR启动子区组蛋白乙酰化和甲基化水平。进一步在LO2细胞给予不同浓度的RTS（10、100和1000 nM）处理72 h,检测细胞脂质水平,观察RTS对PXR以及脂代谢相关基因表达的影响。结果:①仔鼠发育一般指标:与对照组相比,RTS导致PW3子代体重、体重增长率和肝指数均显著下降（P＜0.01,P＜0.05）,RTS20组仔鼠从出生后15天开始出现死亡,至出生后36天全部死亡。RTS5组雌性体重出现明显的追赶性生长（P＜0.05）;②乳汁代谢组学以及RTS代谢:给药组中乳汁脂质含量减少。与母鼠相比,乳汁中存在大量原型药物（P＜0.01）,但吡咯代谢物与蛋白结合物的含量极少（P＜0.01）,子代血清中RTS含量和肝吡咯蛋白结合物（pyrrole-protein adducts,PPA）均比母鼠少（P＜0.01）,雄性子代肝脏PPA含量较雌性多（P＜0.01）;③肝脏病理学改变:给药组PW3子代肝细胞内有明显的空泡变性,并呈剂量依赖性改变,油红O染色呈阳性。RTS5组的PW12子代肝细胞内仍然存在脂肪蓄积;④肝功能及脂质水平:与对照组相比,RTS20组PW3子代血清中谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）水平升高（P＜0.01）,血清总胆固醇（total cholesterol,TCHO）、高密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein chesterol,LDL-C）水平升高（P＜0.01）,低密度脂蛋白胆固醇（high density liptein cholesterol,HDL-C）水平降低（P＜0.01）,LDL-C/HDL-C 比值升高（P＜0.01）。血清总胆汁酸（Total Bile Acids,TBA）和甘油三酯（triglyceride,TG）水平升高（P＜0.01）,肝脏中TG和游离脂肪酸（free fatty acid,FFA）含量均显著增加（P＜0.01,P＜0.05）。RTS5组子代以上指标改变与RTS20组一致或有改变趋势。与对照组相比,PW12子代肝功能指标、TCHO和TBA水平无显著改变,雄性TG水平增加（P＜0.05）。雌雄子代肝脏TG和FFA含量仍然显著增加（P＜0.01,P＜0.05）;⑤脂代谢相关基因表达改变:与对照组相比,给药组PW3肝脏脂肪酸转运蛋白 2（fatty acid transport protein2,FATP2）、脂肪酸转运蛋白 5（fatty acid transport protein5,FATP5）、脂肪酸结合蛋白 1（fatty acid-binding protein1,FABP1）、脂肪酸合成酶（Fatty acid synthase,FASN）、乙酰辅酶 A 羧化酶 α（Acetyl CoA carboxylase α,ACCα）、肉毒碱棕榈酰基转移酶1α（Carnitine palmitoyltransferase 1α,CPT1α）、过氧化物酶体增殖剂激活受体 α（peroxisome prol iferator-activated receptor α,PPARα）和微粒体甘油三酯转运蛋白（microsomal triglyceride transfer protein,MTTP）表达降低,并呈剂量依赖性改变（P＜0.01,P＜0.05）。脂肪酸转位酶（fatty acid translocase/cluster of differentiation,FAT/CD36）和过氧化物酶体增殖剂激活受体 γ（peroxisome prol iferator-activated receptor γ,PPARy）表达增加（P＜0.01,P＜0.05）。RTS5组子代以上基因的改变持续至PW12;⑥核受体及其下游基因表达:给药组PW3和PW12子代肝脏PXR及其下游调控基因细胞色素P450 3A（cytochrome P450 3A,CYP3A）表达均升高（P＜0.01,P＜0.05）。PW3 子代肝法尼醇 X受体（farnesoid X receptor,FXR）表达降低（P＜0.01）,但在PW12无改变;⑦PXR启动子区表遗传修饰改变:给药组PW12雌雄子代肝脏PXR启动子区组蛋白3赖氨酸K9位点乙酰化（histone 3 lysine 9 acetylation,H3K9ac）水平增加（P＜0.01,P＜0.05）,其他组蛋白乙酰化或甲基化位点与PXR启动子区结合无明显改变;⑧细胞实验:RTS处理LO2细胞后,细胞中TG和FFA含量呈浓度依赖性增加（P＜0.05,P＜0.01）,FATP2、FATP5、FASN、CPT1α、PPARα、MTTP、CD36 和 PPARγ 表达与动物实验呈一致性改变（P＜0.01,P＜0.05）。结论:哺乳期母鼠RTS暴露可导致PW3子代脂肪肝,其发生机制可能为RTS激活PXR后,一方面上调其下游基因PPARγ的表达,增加脂肪酸摄取;另一方面下调PPARα的表达,减少脂肪酸的β-氧化,最终导致脂肪肝。子代正常饲养至PW12仍表现为脂肪肝,PXR启动子区H3K9ac水平增加可能参与调控PXR的持续表达增加,从而持续增加肝脏脂肪酸摄取,减少脂肪酸β-氧化,最终造成成年子代脂肪肝的编程效应。