近些年来，结核病在全球表现出了死灰复燃的现象,这为预防和治疗结核病带来了巨大的挑战。特别是耐多药(MDR－TB)和广泛性耐药（XDR-TB）结核病具有分布广，传播快的特点，所以结核病已被认为是当前在全球控制传染性疾病所面临的严峻课题之一。在结核病的治疗中，所用到的一线抗结核药物主要有异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)等,因此其耐药性的出现，对感染耐药性结核的患者的治疗带来很大困难。在当前，对结核分枝杆菌的耐药性分析的规范方法和金标准是传统的培养方法，但是这种方法在整个检测的过程中消耗的时间特别长，因而不能有效地了解并进行正确地治疗结核病。目前结核分枝杆菌耐药的分子机制已基本阐明，经证实耐药结核分枝杆菌临床分离株药物靶编码基因发生突变与耐药性密切相关，是结核分枝杆菌耐药的分子机制。本研究根据GenBank找到结核分枝杆菌L27989, X68081, L08011基因序列，设计特异性引物和探针，构建三重荧光定量PCR体系，并对反应体系中MgCl2、引物、dNTP浓度以及引物退火温度优化后建立结核杆菌PCR反应扩增体系。通过测序、灵敏性试验以及特异性试验对体系进行综合评估。证实了MGB探针荧光定量PCR体系具有较高灵敏性、特异性、稳定性。构建了标准曲线，检出率下线为10copy/ul。eff%分别为99.511%、99.286%、102.114%。R2分别为0.997、0.998、0.999。实现了单管三种荧光标记对不同基因不同突变位点的检测,取得较好结果，为结核耐药基因多重Q-PCR检测试剂盒的研发奠定基础。