【摘 要】
:
目的:GATA4低表达慢病毒载体转染前成骨细胞,并构建GATA表达局部降低的动物模型,探讨转录因子GATA4在体外、体内成骨细胞分化及骨改建过程中的作用。方法:提取小鼠前成骨细胞并用流式细胞仪进行表面标记鉴定。培养小鼠前成骨细胞并进行矿化诱导,Western Blotting检测矿化诱导过程中GATA4及成骨相关蛋白的表达。使用GATA4低表达慢病毒载体转染小鼠前成骨细胞,Western Blot
论文部分内容阅读
目的:GATA4低表达慢病毒载体转染前成骨细胞,并构建GATA表达局部降低的动物模型,探讨转录因子GATA4在体外、体内成骨细胞分化及骨改建过程中的作用。方法:提取小鼠前成骨细胞并用流式细胞仪进行表面标记鉴定。培养小鼠前成骨细胞并进行矿化诱导,Western Blotting检测矿化诱导过程中GATA4及成骨相关蛋白的表达。使用GATA4低表达慢病毒载体转染小鼠前成骨细胞,Western Blotting检测GATA4的表达,CCK8检测GATA4敲低后对细胞增殖的影响。对转染后的小鼠前成骨细胞进行矿化诱导,使用碱性磷酸酶染色、茜素红染色、Western Blotting和Real-time PCR检测其对成骨分化的影响。构建小鼠牙齿移动模型,并局部注射慢病毒降低GATA4的表达,在造模后第14天处死用免疫组化技术检测GATA4在体内的敲低效率以及成骨相关指标在体内的表达情况,Micro-CT和组织学染色(总胶原染色和Goldner三色染色)观测骨生成情况。对转染了慢病毒的小鼠前成骨细胞矿化诱导7天后,提取蛋白,Western Blotting检测MAPK通路相关蛋白p38,p-p38,ERK和p-ERK的表达。结果:流式鉴定结果表明小鼠前成骨细胞具有间充质干细胞的特征。Western Blotting结果表明,在矿化诱导过程中,转录因子GATA4的表达与成骨相关蛋白一样随着时间升高。体外实验表明,实验组(shGATA4)GATA4的蛋白表达水平与对照组(shCTRL)相比明显降低,CCK8结果表明成骨细胞的增殖没有受到影响。在矿化诱导条件下,实验组的碱性磷酸酶活性和矿化结节形成量比对照组少。Western Blotting和Real-time PCR结果表明实验组成骨特异性蛋白(成骨特异性转录因子(osterix,OSX)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和骨钙素(osteocalcin,OCN))的表达水平在14天时均有不同程度的下调,与对照组相比差异显著(P<0.05)。体内实验表明,造模14天时(shGATA4)GATA4在体内的表达水平与对照组(shCTRL)相比明显降低,Micro-CT和组织学染色表明14天时实验组左上颌第一磨牙近中根和远中根间牙槽骨区骨量与对照组比明显减少(P<0.05)。通路研究表明,GATA4敲低后,实验组p-p38蛋白表达水平与对照组相比明显减少,而p-ERK无明显变化。结论:慢病毒介导的GATA4低表达载体成功在体外、体内下调了目的基因的表达,并通过p38通路抑制成骨细胞的分化及骨改建。
其他文献
<正>喜茶开始加速推进加盟业务。3月9日,喜茶首次公布开放事业合伙门店业务后的经营数据,并宣布开放日本、新加坡、泰国等海外市场的事业合伙人申请。分析指出,在国内市场竞争激烈下,不少品牌将目光转向海外市场从而提升市场占有率。然而,在海外市场站稳脚跟并非易事,做好本土化和差异化是关键。
第一部分糖尿病性膀胱活动低下小鼠模型建立及尿动力学评估目的:通过尿动力学评估,探究链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病小鼠发生膀胱排尿功能障碍变化,为进一步膀胱活动低下(UAB)的临床研究提供实验动物平台。方法:采用链脲佐菌素(STZ,65mg/kg)注射到小鼠腹腔内制备糖尿病小鼠动物模型,另设同龄小鼠为正常对照组(n=10)。每两周测量一次各组小鼠体重(BW)和空腹血葡萄糖浓度(FBG),STZ诱导
图像容易受外界照明条件的影响或相机参数条件的限制,导致图像整体偏暗、视觉效果不佳,降低了下游视觉任务的性能,从而引发安全问题。以人脸识别任务为驱动,提出了一种基于对比学习范式的非成对低光照图像增强算法Low-FaceNet。Low-FaceNet主干采用基于U-Net结构的图像增强网络,引入特征保持、语义分割和人脸识别3个子网络辅助图像增强网络的训练。使用对比学习范式可以使得真实世界大量非成对的低
背景:随着人类生活水平的提高以及生活方式的改变,糖尿病(Diabetes mellitus,DM)的发病率有了爆发式的增长,已成为继肿瘤和心血管疾病之后,严重影响人类健康的重大隐患。2型糖尿病(Type 2 diabetes,T2DM)占糖尿病的比重高达90%以上,是最常见的糖尿病类型。目前研究认为胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)是T2DM主要的发病机制。炎症的信号传导途径
为了探究工作条件下堆垛机柱脚焊接接头的疲劳寿命问题,对堆垛机柱脚焊接接头进行了动载荷作用下的疲劳寿命分析,并对影响疲劳危险焊缝疲劳强度的相关尺寸进行了优化。首先,建立了含柱脚焊缝的堆垛机柱脚有限元模型,并使用典型受力模式下的静力学分析与焊线处结构应力分析,确定了柱脚危险焊缝位置;然后,建立了含柱脚危险焊缝的堆垛机有限元模型,采用动力学分析得到了动载荷作用下危险焊缝的疲劳载荷谱,并采用结构应力法求解
目的:探讨p27基因敲除在雌激素缺乏诱导的骨质疏松中的影响及机制方法:建立野生型(WT,Wild type)小鼠及P27基因敲除(p27-/-)小鼠卵巢切除(OVX)模型。通过X线、Micro-CT和总胶原染色等方法观察了骨容量的变化;通过HE染色、ALP染色、TRAP染色、免疫组织化学染色、Western blot和RTqpcr等方法观察了成骨骨形成和破骨骨吸收的变化;通过流式细胞术、Weste
1997年,Zadina从牛脑中分离出两个对μ阿片受体有高度亲和性和选择性的阿片肽-内吗啡肽-1(EM-1,Tyr-Pro-Trp-Phe-NH2)和内吗啡肽-2(EM-2,Tyr-Pro-Phe-Phe-NH2),这两个阿片肽被公认为是μ阿片受体选择性的内源性配体。在低浓度下,内吗啡肽可以产生与吗啡同样的镇痛作用,且由于是内源性的镇痛物质,故与吗啡相比,其副作用较小。内吗啡肽是肽类物质,具有酶解
第一部分 沉默AdipoR1对CIA小鼠关节炎症及骨侵蚀的影响目的:前期研究表明脂联素(Adiponectin,AD)参与类风湿关节炎RA(Rheumatoid arthritis,RA)的发病过程,胶原诱导关节炎小鼠(Collagen-induced arthritis,CIA)关节局部高表达AD可促进炎症因子、金属蛋白酶分泌,激活破骨细胞,加重骨侵蚀。AD主要通过其受体发挥生物学作用。脂联素受