研究背景:在我国,肺癌的发病率和死亡率占癌症总体发病率和死亡率的第一位,其水平与发达国家相当。其中,非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)作为肺癌的主要类型之一,其发病率占据了肺癌总发病率的80%～85%,并且其5年生存率不到15%。中医药作为具有多组分、多靶点、多途径优势的治疗手段,对NSCLC患者限制瘤体的增殖,改善患者临床症状,防止治疗后复发,提高患者生活质量等方面均有较好的临床疗效。但由于基础研究的匮乏及中西医理论体系的区别,大量中医经验方缺乏现代医学证据的支持。鱼腥草是三白草科蕺菜属植物蕺菜的干燥地上部分和新鲜全草。其味辛、性属微寒、归于肺经、肝经、心经,功效具有有清热凉血、解毒散结、化痰止咳、镇痛等,民间常用于肺痈吐脓、痰热喘咳、痈肿疮毒等疾病的治疗。在中医古方中就曾有单用鱼腥草治疗肺痈(性状类似于现代医学肺癌的一种疾病)的历史。国医大师周仲英先生在他所提出的治疗肺癌验方“周氏克金岩”方中也有对此药的应用。针对鱼腥草中化学成分提取物的研究有很多,其研究方向也往往纷繁多样。本研究主要关注了新鱼腥草素钠(sodium new houttuyfonate,SNH)在抗非小细胞肺癌的多种作用机制方面的研究。同时,内源性竞争RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)理论为现代医学研究最为热门的研究方式之一。研究目的:本研究从中西医结合的角度(尤其是ceRNA的角度),探索鱼腥草的效应成分——新鱼腥草素钠抑制非小细胞肺癌的作用机制。研究方法:本研究首先运用CCK8实验探索SNH对NSCLC细胞系的细胞毒性,运用克隆形成实验探索SNH对NSCLC细胞增殖的影响,通过HOCHEST33258细胞核染色实验和Annexin V/PI流式细胞学实验明确SNH对NSCLC细胞凋亡作用影响,并采用Western Blot探索其凋亡相关信号通路。其次运用细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别探索SNH对NSCLC细胞迁移和侵袭能力的影响,qRT-PCR、Western Blot和免疫荧光实验明确其迁移和侵袭相关作用的分子机制。然后通过转录组学高通量测序分析最具相关性信号通路,并明确其最具可能的作用方式及靶基因为Linc00668。在生物信息学明确Linc00668与肿瘤关系后,构建其过表达与干扰模型,明确其作用机制。通过生物信息学分析Linc00668竞争靶基因及中间miRNA,并明确miRNA和靶基因对信号通路影响。最后通过双荧光素酶报告基因明确竞争性结合位点,并构建小鼠模型,通过生物发光技术、H&E染色、免疫荧光和免疫组化等方式,进行SNH对体外实验所发现信号通路的评估和验证。研究结果:本研究首先证实了SNH对NSCLC细胞具有促进凋亡,抑制增殖、侵袭和迁移的作用,并且其凋亡机制是通过剪切Caspase 3和PARP蛋白而达成,而其抑制细胞侵袭迁移的机制是抑制了EMT进程。然后,通过转录组学测序发现SNH可能通过调控Linc00668抑制NSCLC细胞EMT进程,并且通过过表达和干扰Linc00668明确了 Linc00668能够促进NSCLC细胞迁移/侵袭能力。紧接着证实了Linc00668是通过与slug的mRNA在3’UTR竞争性结合miR-147a达到调控EMT进程的作用。最后从动物模型角度证实了SNH抑制非小细胞肺癌迁移是通过Linc00668/miR-147a/slug的调控。研究结论:本研究发现了SNH通过抑制增殖,促进凋亡,抑制迁移/侵袭等多种途径抗非小细胞肺癌,并深入研究了SNH调控EMT信号通路的路径是Linc00668/miR-147a/slug轴。本研究通过当下研究的焦点ceRNA理论,对中药单体SNH抗NSCLC作用机制进行解释,是中药理论研究的创新之举,为中药基础研究提供了新的思路。