【摘 要】
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研究目的：在参考已有的对顺式作用丁型肝炎病毒（HDV）核酶切割性质报道的基础上,设计HDV核酶的反式作用形式,研究其体外切割性质,获得反式作用HDV核酶体外切割底物的酶动力学常数
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研究目的：在参考已有的对顺式作用丁型肝炎病毒（HDV）核酶切割性质报道的基础上,设计HDV核酶的反式作用形式,研究其体外切割性质,获得反式作用HDV核酶体外切割底物的酶动力学常数.并以此为基础,改变决定反式作用HDV核酶识别特异性的H1区的序列,设计针对来源于HBV mRNA片段进行识别并切割的反式作用HDV核酶,研究其体外切割底物的能力和酶动力学常数.并进一步将其重组入真核表达载体导入细胞内,观察其在细胞内切割外源mRNA(HBV mRNA)的可能性,为反义基因治疗HBV奠定基础.结论：HDV核酶的顺式自我裂解的二级结构在改为反式作用形式后,仍具有切割活性.而且将其识别序列改变并经过设计后,能针对非HDV来源的RNA片断如HBV的mRNA片断进行切割,在细胞水平也初步观察到其对靶基因的表达有一定的抑制作用.这为将HDV核酶发展为进一步用于抑制某些病毒如HBV的反义治疗工具开辟了途径.
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