论文部分内容阅读
探索能够诱导和稳定G-四链体DNA的小分子化合物是当前研究抗肿瘤药物的一大热点。本论文设计合成了三个三联吡啶配体以及它们相应的金属铂(Ⅱ)配合物,并且通过多种实验方法研究了这六种化合物与人端粒HTG G-四链体、i-motif DNA、原癌基因启动子c-Myc和c-Kit2G-四链体DNAs的相互作用,以及抑制端粒酶活性和抗癌细胞增殖的能力。FRET-melting和PCR Stop实验表明,金属铂(Ⅱ)配合物能够有效地稳定G-四链体DNAs,而配体的效果较差。FRET-melting实验中,配合物在含有100mM KCl的磷酸缓冲溶液中,2μM时入端粒F21T的熔点升高值(ATm)在18-20℃范围内,而相应配体的ATm值小于15℃; PCR Stop实验中,配合物浓度在小于8μM的范围内就能够完全抑制HTG、c-Myc和c-Kit2DNAs的PCR产物,而配体在10μM时观察到其抑制效果,说明配合物对G-四链体DNA的稳定作用强于配体。紫外熔点实验表明配体对人端粒i-motif DNA的熔点温度略有影响,而配合物使i-motif DNA的熔点温度降低了大约7℃,说明配合物对i-motif DNA具有去稳定作用。FID实验中,配合物在小于0.67μM的范围内均测得其与G-四链体DNAs的DC5o值,而对于双螺旋ds26仅配合物3得到DCso值,这表明配合物对G-四链体DNAs具有很好的选择性；竞争的FRET-melting实验中,配体和配合物在10倍过量ds26存在条件下表现出对G-四链体DNAs有很好的选择性,并且配体L1-L3对F21T有更好的选择性,而配合物1-3对c-Myc和c-Kit2G-四链体DNAs有更好的选择性。紫外可见吸收滴定实验表明,配体和配合物对四链体DNAs有很强的相互作用,其结合常数在105-106范围内,并且配合物与四链体DNAs的相互作用强于配体；CD实验表明,化合物能诱导HTG DNA从无序结构或杂交G-四链体结构转变为反平行G-四链体结构,尽管对c-Myc和c-Kit2G-四链体DNAs仅稍有扰动。此外,配体对i-motif DNA的构象没有显著影响,而配合物对i-motif DNA具有去稳定作用。TRAP实验表明,配体和配合物对端粒酶都有一定的抑制作用,配合物对端粒酶的抑制作用强于配体。MTT实验表明,化合物对HepG2和MCF-7癌细胞的增殖都有一定的抑制作用,配体L1-L3对HepG2和MCF-7两种癌细胞的IC50值分别为2.9、1.4和1.1gM以及2.9、3.6和1.1μM,配合物1-3的IC50值为15.6、13.0和28.7μM以及24.6、69.1和29.5μM;对于HepG2细胞,除配合物1将癌细胞阻滞在G1和S期,其余化合物将癌细胞阻滞在S期,对于MCF-7细胞,除配体L3将癌细胞阻滞在G1期,其余化合物将癌细胞阻滞在G1和S期。