【摘 要】
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木质素是三种羟基肉桂醇——p-肉桂醇、松柏醇和芥子醇分别形成木质素的H、G、S单体而氧化聚合而成的芳香多聚体。木质素是维管植物的一种主要组成组分,是植物适应陆地环境的
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木质素是三种羟基肉桂醇——p-肉桂醇、松柏醇和芥子醇分别形成木质素的H、G、S单体而氧化聚合而成的芳香多聚体。木质素是维管植物的一种主要组成组分,是植物适应陆地环境的重要特征之一。然而,木质素的存在严重影响植物体在造纸与畜牧业生产中的应用,降低了纸浆得率和饲料消化率。CCR是木质素单体生物合成特异途径中的第一个关键酶,其活性直接影响着植物体木质素总量。通过基因工程降低CCR基因的表达,对纸浆造纸与畜牧养殖业具有重要的指导意义。本文是在已经成功将ccr片段反向插入pMD20-T载体并构建大肠杆菌表达质粒的基础上,通过生物信息学软件对ccr进行了功能结构分析,构建ccr的植物表达载体,通过转化农杆菌侵染大豆和烟草组培苗,为鉴定CCR基因在转基因植物中的表达做准备。主要结果如下:1.利用多种生物软件对CCR基因进行序列分析,结果表明该CCR基因片段与香脂杨和棉毛杨等同源性达到97%以上,其成熟蛋白为亲水性、主要存在于细胞膜,具有大多数植物CCR蛋白普遍存在的KNWYCYGK保守性基序,其二级结构中共包含12个a螺旋、20个p折叠、11个卷曲。2.利用限制性内切酶Sma Ⅰ和Xba Ⅰ酶切pMD20-T-ccr质粒和pBI121质粒,将得到的CCR基因片段与pBI121DNA酶切大片段连接,得到重组质粒,经特异引物扩增鉴定正确后,我们将其命名为pBI121-ccr,将其导入根瘤农杆菌LBA4404。3.通过优化确定大豆无菌苗的最佳组培体系:大豆经表面消毒,发芽1-2天后,外植体经70%酒精消毒30秒,再用0.1%升汞消毒10秒,完整的发芽大豆外植体转接到MS固体培养基上,大约2-3周,便可得到大豆无菌苗。4.通过根瘤农杆菌介导,利用叶盘法侵染,侵染的大豆下胚轴和烟草叶片外植体在含有6-BA和NAA的MS培养基上均可诱导产生愈伤组织,当NAA为0.05mg/L,6-BA为0.5mg/L时对愈伤组织的诱导出芽效果最佳;在含有0.3mg/LNAA的MS培养基中诱导生根效果最佳;愈伤组织已分化出叶片和根,因此我们建立了转基因植物的组培体系,其后期检测工作正在进行中。
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