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肿瘤细胞膜糖蛋白作为影响肿瘤细胞信号传递、免疫原性的关键分子,与肿瘤细胞的发生、发展有着极为密切的联系。肿瘤细胞膜糖蛋白的过量表达、缺失或结构改变,直接影响肿瘤细胞的恶性转移、免疫逃逸。
本论文通过两种方法分离小鼠肺腺癌细胞LA795细胞膜表面的糖蛋白,并制备糖蛋白-量子点荧光纳米颗粒,以实现在活体中对糖蛋白与免疫系统的相互作用进行荧光示踪。第一种方法分离天然的肿瘤细胞膜糖蛋白。具体为利用亲和素对糖基的亲合作用,以亲和层析的方法提取含有葡萄糖及甘露糖的糖蛋白。第二种方法分离得到经过代谢标记的糖蛋白。首先合成含叠氮甘露糖,对肿瘤细胞进行代谢标记,然后通过点击化学反应分离出肿瘤细胞膜表面的糖蛋白。
同时,自行合成了量子点荧光纳米颗粒。量子点是荧光性能极好的纳米颗粒,可以实现对活体较深部位的成像,并且稳定、不易淬灭。利用巯基乙酸作稳定剂合成水溶性CdSe/ZnS核壳型量子点荧光纳米晶体,粒子尺寸均匀、荧光稳定。随后,通过酰胺反应制备糖蛋白-量子点荧光探针进行活体成像实验。结果表明,糖蛋白-量子点荧光纳米颗粒在小鼠淋巴结处聚集,在活体水平证实了肿瘤细胞膜糖蛋白的抗原特性。其后,进行的细胞因子表达芯片实验也表明注射络合物的小鼠体IL-6,IL-12,IFNγ等细胞因子的表达成升高趋势,而这些正是与肿瘤免疫相关的细胞因子。这个结果验证了此糖蛋白-量子点荧光探针系统用于研究肿瘤细胞糖蛋白与免疫系统相互作用的有效性。
此外,在本论文中将量子点用于肿瘤细胞靶向成像中。合成CdSe/zns量子点,并与透明质酸偶联,得到透明质酸.量子点络合物。借助CD44受体-透明质酸的相互识别,实现肿瘤细胞的靶向性成像。
综上所述,本研究成功利用量子点一糖蛋白荧光探针系统,实现对大分子与免疫系统相互作用的活体水平的观察,并通过细胞因子芯片实验对结果进行了印证。肿瘤细胞膜糖蛋白具有抗原特性,为进一步研究糖蛋白介导的肿瘤细胞的恶性转移、免疫逃逸奠定了一定基础,并为开发新型抗肿瘤药物、肿瘤疫苗提供新的思路。