论文部分内容阅读
目的:1.检测新疆石河子绝经后女性在不同糖、骨代谢状态下LRP5蛋白的表达情况及rs599083、rs901825、rs7125942位点的基因多态性。2.探讨LRP5蛋白表达及基因多态性与骨密度(Bone Mineral Density,BMD)及骨代谢指标的关系,为该人群2型糖尿病(Type 2 Diabetic Mellium,T2DM)合并骨质疏松(Osteoprosis,OP)的防治提供依据。方法:1.收集2018年6月到2019年6月份来院就诊的绝经后女性为研究对象。根据OGTT、糖尿病病史及BMD分为四组:糖耐量正常合并骨量正常组(A组50例)、糖耐量正常合并骨量异常组(B组53例)、T2DM合并骨量正常组(C组57例)、T2DM合并骨量异常组(D组80例)。2.研究对象临床一般指标的测定:记录研究对象的年龄、绝经年限,测定身高、体重、腰围、臀围、并计算体质指数(Body Mass Index,BMI)和腰臀比(Waist Hip Ratio,WHR);生化指标的测定:采用罗氏全自动生化分析仪测定空腹血糖(Fasting Plasma Glucose,FPG)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low Density Lipoprotein-C,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(High Density Lipoprotein-C,HDL-C)、血钙(Calcium,Ca)、血磷(Phosphorus,P)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)等生化指标、高压液相色谱法测定糖化血红蛋白(Hemoglobin A1c,Hb A1c)、采用双能X线吸收法(Dual energy X-ray absorptionmetry,DEXA)测定骨密度(Bone ineral density,BMD)。3.采用Sequenom飞行时间质谱法测定LRP5基因rs599083、rs901825、rs7125942位点的基因型。4.采用酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)测定LRP5蛋白的表达。5.统计分析:采用SPSS20.0作统计学分析,计量资料采用(?)±s;组间指标比较采用方差分析;采用χ2检验比较不同位点组间基因型及等位基因分布频率;相关性分析LRP5蛋白与临床指标的相关性;多元线性回归分析BMD的影响因素。结果:1.组间基线资料比较:B、D组年龄、绝经年限较A组增加(66.25±10.45、69.03±7.87vs60.74±9.91),(P<0.05)。2.经协方差分析后组间生化指标比较:C、D组的FPG、Hb A1c%的水平均高于A组(8.25±2.91、8.00±2.40 vs 5.00±0.63;7.61±1.45、7.76±1.56 vs 5.8±0.44),(P<0.01);B组TG的表达水平低于A组(1.31±0.79vs2.00±1.43),(P<0.05);B、D组BMD(L1-4)、BMD(股骨颈)的表达水平均低于A组(0.89±0.16、0.92±0.10 vs 1.17±0.16;0.72±0.11、0.76±0.11 vs 0.94±0.13),(P<0.01)。3.LRP5蛋白表达及相关性分析:B、C、D组LRP5蛋白浓度均低于A组(9.767±6.231、11.340±6.637、8.787±4.09vs19.281±11.922),(P<0.05)。LRP5蛋白浓度与年龄(r=-0.322、P=0.001)、绝经年限(r=-0.267、P=0.008)、FPG(r=-0.225、P=0.025)呈负相关,与BMI(r=0.226、P=0.024)、BMD(L1-4)(r=0.284、P=0.004)、BMD(股骨颈)(r=0.297、P=0.003)呈正相关。4.LRP5基因型及等位基因频率分析:LRP5基因rs599083、rs901825、rs7125942位点的基因型经检验均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。LRP5基因rs599083位点三种基因型TT、GT、GG,基因型分布频率分别为54%、39%、7%,T、G等位基因的分布频率分别为为57%、43%,与A组相比,B组、C组、D组基因型及等位基因分布频率组间差异无统计学意义。LRP5基因rs901825位点三种基因型GG、GC、CC,基因型分布频率分别为43%、49%、8%,G、C等位基因的分布频率分别为68%、32%,D组基因型分布频率与A组相比差异具有统计学意义,(P<0.01)。LRP5基因rs7125942位点两种基因型为CC、GC,基因型分布频率分别为90%、10%,G、C等位基因的分布频率分别为91%、9%,B组基因型分布频率与A组相比差异具有统计学意义,(P<0.01)。5.LRP5基因不同位点突变基因型与野生基因型组间各指标比较:LRP5 rs599083位点,A组,突变基因型(GG/GT)与野生基因型(TT)基因型相比,血P、BMD(L1-4)降低(1.08±0.11vs1.17±0.15,1.11±0.13vs1.23±0.17),(P<0.05);C组,突变基因型(GG/GT)与野生基因型(TT)基因型相比,年龄、血LDL、BMD(L1-4)降低(58.33±8.68vs63.36±9.13,2.42±1.01vs2.83±0.86,1.14±0.15 vs 1.23±0.19),(P<0.05)。LRP5rs901825位点:A组,突变基因型(GC/CC)与野生基因型(GG)相比,年龄升高(65.06±9.88vs55.91±8.73)、BMD(股骨颈)降低(0.89±0.11vs1.01±0.10),(P<0.05);B组,突变基因型(GC/CC)与野生基因型(GG)相比,血LDL升高(2.98±0.86vs1.99±0.70),(p<0.01);C组,突变基因型(GC/CC)与野生基因型(GG)相比,年龄、绝经年限、LDL、ALP升高(65.19±8.26vs54.24±6.92,15.93±7.84vs6.48±5.97,3.27±1.05vs 2.40±0.94,75.19±21.51vs 62.67±11.49),(P<0.05);D组,突变基因型(GC/CC)与野生基因型(GG)相比,血FPG、Hb A1c%、HDL降低(7.52±1.98vs9.36±2.86,7.36±1.24vs8.74±2.17,1.21±0.31vs1.45±0.05),(P<0.05)。LRP5 rs7125942:A组,突变基因型(GC)与野生基因型(CC)相比,血LDL降低(2.24±0.40vs2.87±0.90),(P<0.05);C组,突变基因型(GC)与野生基因型(CC)相比,BMD(L1-4)降低(1.03±0.17vs1.21±0.18),(P<0.05)。6.多元线性回归分析结果显示:rs599083位点基因多态性、高年龄、高ALP是BMD(L1-4)升高的负向影响因素,高LRP5蛋白浓度是BMD(L1-4)升高的正向影响因素;高年龄是BMD(股骨颈)升高的负向影响因素,高LRP5蛋白浓度、一定范围内高BMI是BMD(股骨颈)升高的正向影响因素。结论:LRP5基因rs599083、rs901825、7125942位点的基因多态性及突变使LRP5蛋白表达降低,引起骨代谢的异常,从而参与新疆石河子绝经后T2DM女性OP的发生与发展。