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目的：通过分析糖尿病视网膜病变非增殖期(NPDR)患者和糖尿病无视网膜病变(NDR)患者血清miRNA表达谱的差异,寻找NPDR患者特异性血清miRNA,为糖尿病视网膜病变(DR)的早期诊断提供生物标志物,并为进一步探讨miRNA在DR发病机制中的作用提供理论依据。方法：根据眼底荧光血管造影结果选取30例2型糖尿病非增殖期视网膜病变(NPDR)患者为实验组,男11例,女19例,30例2型糖尿病无视网膜病变(NDR)患者为对照组,男12例,女18例。采用μ ParafloTM miRNA微流体芯片技术检测并筛选出两组患者血清中表达差异显著的rniRNAs。应用反转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术验证芯片结果,确定目的miRNAs。 Pearson法分析目的miRNAs的血清表达量与血糖、血脂的相关性。应用PicTar, TargetScan与MiRanda软件综合预测目的miRNAs的靶基因,取三款软件的交集作为最终靶基因。结果：1.两组患者的年龄、性别、BMI、血压、UAER、 FBG、糖尿病病程、ABI、 PWV相比无统计学意义(P>0.05)。与NDR组相比,NPDR组的TG、TC、HbAIC明显增高(P<0.05)。2.建立了NPDR患者血清miRNA表达谱。与NDR对照相比,NPDR患者血清中miR-19a, miR-29c, miR-4659b, miR-144表达明显上调(分别为2.09倍、2.34倍、5.46倍、1.01倍),miR-6837, miR-449c,-miR-3139, miR-3944, hsvl-miR-H15表达显著降低(分别为10.18倍、12.59倍、10.48倍、2.07倍、1.26倍)。3.在独立的30例M NPDR和30例NDR患者血清样本中进行差异表达显著的miRNAs的定量PCR检测,选取NPD R患者血清中表达上调的niR-19a, miR-29c, miR-4659b及miR-144进行验证。结果：NPD R患者血清中miR-19a, miR-29c, miR-4659b的表达明显上调,与NDR组相比差异有统计学意义(Z值分别为：-4.184,-4.45,-2.794,双侧P均<0.05),与芯片结果相符。1niR-144 Cq值半数以上超出35,提示血清中表达量较低,后续试验中排除。4. Pearson相关性分析显示：血清miR-19a的相对表达量与高密度脂蛋白(HDL)水平显著正相关(r=0.302,P<0.05),显示随HDL值升高,血清miR-19a的表达量显著增加；血清miR-29c, miR-4659b的相对表达量与HbA1C值显著正相关(r分别为0.379,0.350,P均<0.05),显示随HbA1C值升高,血清miR-29c, miR-4659b 的表达量明显增加。5.受试者工作曲线(ROC)曲线分析显示：miR-19a, miR-29c, miR-4659b的曲线下面积(AUC)分别为：0.814,0.834,0.710,均大于0.7,表明这3个miRNAs对诊断NPDR均有一定的价值,其中miR-29c的AUC面积大于miR-19a和miR-4659b的AUC,表明血清miR-29c对诊断NPDR的敏感度和特异度较高。6.生物信息学分析：通过靶基因软件预测发现,miR-19a调控PIK3CA, PAFAH2, CR2,TFPI, IL20等靶点,广泛参与VEGF信号通路、ErbB信号通路、脂类代谢、细胞凋亡等。miR-29c调控AKT2, LAMA2, MDM2, PMID,CYCS, MAP4KA等靶点,广泛参与MAPK信号通路、胰岛素信号通路、细胞因子及受体的相互作用、细胞外基质受体相互作用、p53信号通路等。MiR-4659b调控ADCY6, CXCL5, TSC1, IL11,EDA2R等靶点,广泛参与间隙连接,血管平滑肌收缩、胰岛素信号通路、mTOR信号通路、细胞因子及受体的相互作用。结论：1.NPDR患者血清miR-19a, miR-29c, miR-4659b高表达。ROC曲线分析提示这3种miRNAs对NPDR的诊断有一定的价值。2.血清miR-19a的表达量与HDL水平呈正相关,miR-29c, miR-4659b的表达量与HbAlC值显著正相关。3. NPDR患者特异性血清niR-19a, miR-29c, miR-4659b可能通过调控糖、脂代谢、VEGF等各种细胞因子、细胞外基质增生、细胞凋亡等,广泛参与了DR的发生发展4.血清miR-19a, miR-29c, miR-4659b极有可能作为早期诊断DR的生物标记物。