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目的：PCR扩增出肺炎衣原体(Cpn)热休克蛋白10(Hsp10)基因，构建重组质粒pQE30／Hsp10，在大肠杆菌(E．coli)中进行诱导表达，纯化获得重组融合蛋白rHsp10。研究该重组蛋白在体外诱导小鼠巨噬细胞表达并产生前炎症细胞因子TNF-α和IL-6的水平及诱导细胞凋亡作用，为进一步探索Cpn感染致病的分子机制提供试验依据。 方法：针对Cpn Hsp10基因设计引物，以Cpn AR39株基因组DNA为模板，PCR扩增目的基因片段，将其插入pUCm-T载体，通过蓝白斑初筛，酶切分析、PCR及测序鉴定筛选阳性重组体；将Hsp10基因亚克隆至pQE30表达载体，构建重组质粒pQE30／Hsp10，然后转化至宿主菌M15中进行诱导表达，利用SDS-PAGE和Western-Blot进行分析和鉴定表达产物，Ni-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白rHsp10。用不同浓度的rHsp10刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7，ELISA检测经刺激后的RAW264.7细胞产生的TNF-α和IL-6水平；以RT-PCR方法分析TNF-α和IL-6 mRNA的表达。以MTT法检测经rHsp10处理后RAW264.7细胞的增生或抑制作用，用Hoechst33258荧光染色、DNA片段化分析、细胞凋亡试剂盒检测经rHsp10处理后RAW264.7细胞的凋亡情况。 结果：PCR成功扩增出Cpn Hsp10基因片段(309bp)，构建了重组质粒pQE30／Hsp10，并在M15菌中高效表达出M_r约为15kDa的Hsp10重组融合蛋白，超声裂解后SDS-PAGE分析目的蛋白在菌体细胞内以可溶性形式表达，经Ni-NTA亲和层析柱纯化获得纯度在95％以上的rHsp10。rHsp10能诱导RAW264.7细胞表达TNF-α和IL-6的mRNA，并以时间、剂量依赖方式刺激细