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肝硬化是世界范围的疾病,严重威胁人们的身体健康。肝纤维化是许多慢性肝病发展至肝硬化的必经阶段。硬化的肝脏能否转归正常目前还不清楚,但近来研究表明通过有效治疗,纤维化肝脏能够恢复正常,因此肝纤维化阶段是治疗的关键阶段。肝纤维化是损伤修复的反应,包含着肝细胞的凋亡坏死和再生,慢性炎症反应,基质的合成和降解等过程。抗纤维化研究和治疗主要围绕这几方面进行。Notch信号是进化上高度保守的信号途径之一,介导相邻细胞间直接的信号转导,广泛参与细胞命运决定,细胞增殖,分化,凋亡等生理病理过程。但是目前还没有Notch信号与肝纤维化关系的研究。以往研究表明Notch信号参与调节肝再生和胆管发育,并且在免疫细胞的发育和功能调节中起着十分重要的作用,因此我们推测Notch信号在肝纤维化中必然发挥重要作用。我们主要进行了如下几方面的研究:1.建立小鼠CCl4肝纤维化模型,实时定量PCR和免疫荧光方法检测肝脏Notch信号变化。2.在RBP-J敲除小鼠上建立肝纤维化模型,HE、Masson、Sirius Red和αSMA等肝脏组织学染色检测Notch信号阻断后肝纤维化水平。3.骨髓移植实验判断RBP-J敲除影响的肝脏本身因素和骨髓来源的因素在肝纤维化中的作用。4. FACS分析肝脏浸润的炎性细胞,检测发生异常变化的细胞群。5.检测巨噬细胞的功能变化,主要包括吞噬能力,MMPs的表达和巨噬细胞的极化。6. microRNA芯片技术筛选因RBP-J敲除而变化的miRNAs。7.体内外实验以候选miRNA对巨噬细胞进行功能挽救。结论:肝纤维化过程中Notch信号激活;RBP-J敲除后肝脏有大量的炎性细胞浸润,肝损伤加重,肝纤维化水平明显加重;骨髓移植实验发现Notch信号部分通过骨髓来源的细胞群影响肝纤维化水平;FACS检测发现RBP-J敲除小鼠肝脏浸润有大量的中性粒细胞和巨噬细胞;RBP-J敲除小鼠肝纤维化的缓解减慢;RBP-J敲除巨噬细胞吞噬能力下降,MMP2和MMP13的表达水平下降,并向伤口愈合型巨噬细胞极化;Notch信号通过间接的途径调节MMP2和MMP13的表达;发现一组因RBP-J敲除而变化的miRNAs,其中miR-188-5p在Notch阻断后表达上调;3’UTR报告基因实验证明miR-188-5p调节MMP2和MMP13;Notch信号抑制miR-188-5p所在的非编码的转录本Clcn5-005的表达;体外LPS刺激的巨噬细胞促进小鼠肝纤维化的缓解,当RBP-J敲除时这种作用消失,进一步抑制miR-188-5p时又能恢复促肝纤维化缓解的作用。