拟南芥IMPRINTED GENE 1亚细胞定位及功能分析

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RNA解旋酶参与基因转录、mRNA前体的加工、成熟、转运、翻译起始及核糖体装配,核糖体RNA加工等细胞过程,在植物生长发育调控和对逆境胁迫响应过程中起重要作用,但目前只了解少数的RNA解旋酶基因的功能。基因印记是指一对同源基因中来自于一个亲本的基因表达,而来自另一亲本的基因不表达的现象。基因印记使得基因因其来源于父本或母本的不同而在受精后呈现不同的表达水平。我们前面的研究鉴定了一个编码DEAD-box RNA解旋酶的拟南芥基因IMPRINTED GENE1(IMG1),该基因不在花粉中表达,可能属于父本印记基因,其突变体的胚乳发育异常。  IMG1编码DEAD-box RNA解螺旋酶,包含两个保守的结构域。IMG1定位在细胞核中,而且在核仁中更为富集。为了进一步研究蛋白质的哪一个区段决定IMG1的亚细胞定位,我们利用烟草叶片转化不同区段蛋白质与GFP融合蛋白的方法,研究了IMG1不同区段在其亚细胞定位中的作用。我们构建了pMDC43-35S::IMG1(1-370aa)-GFP、pMDC43-35S::IMG1(1-400aa)-GFP、pMDC43-35S::IMG1(1-501aa)-GFP、pMDC43-35S::IMG1(1-582aa)-GFP、 pMDC43-35S::IMG1(370-679aa)-GFP、pMDC43-35S::IMG1(501-679aa)-GFP载体分别和35S::H2B-mCherry表达载体共转化本生烟烟草叶片,发现IMG1前50个氨基酸和第501-679位氨基酸决定了IMG1细胞核定位,IMG1第370-501位氨基酸决定了IMG1的核仁定位。  序列分析显示,IMG1与酵母SPB4和HAS1序列相似性很高,后两者都参与核糖体rRNA的加工。通过酵母遗传互补实验发现,拟南芥IMG1能够互补酵母SPB4和HAS1的突变体株系YFL002C和YMR290C的热敏感表型,表明拟南芥IMG1也可能参与植物中核糖体rRNA前体的加工过程。为了进一步研究IMG1是否参与核糖体rRNA的加工,我们以开花后1-8d img1/+突变体角果的为材料,利用半定量RT-PCR的方法检测了pre-rRNA的加工。发现img1/+突变体的pre-rRNA的C1和C2切割点的不能被正确切割,导致5.8S rRNA和25S rRNA加工出现问题。  许多RNA解旋酶参与pre-mRNA的加工,为了检测IMG1是否参与印记基因的加工,我们以开花后1-3d img1/+突变体角果为材料,利用半定量RT-PCR的方法检测了印记基因pre-mRNA的剪接,发现23个印记基因的剪接异常,同时发现9个印记基因的表达上调,这些结果表明IMG1通过参与印记基因的剪接,影响胚乳的发育。  通过RNAi的方法抑制拟南芥IMG1的表达,发现转基因幼苗生长缓慢。表明IMG1对植株的发育起到重要的作用。
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