研究目的:肝纤维化是细胞外基质在肝脏内过度沉积的病理过程,多与慢性肝病毒感染、酒精以及非酒精性脂肪性肝病等伴行,其最终发展成为肝硬化、门脉高压及肝功能衰竭。肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）的过度活化是肝纤维化发展的中心环节,抑制HSC的活化及增值,或促进HSC的凋亡是缓解肝纤维化的途径之一。在抗肝纤维化的天然机制中,免疫细胞中的自然杀伤细胞（natural killer cell,NK）对HSC有直接的杀伤效应,增加肝脏中NK细胞数量和活性能够明显减少HSC的活化和细胞外基质的生成,缓解肝纤维化的进程。前列腺素（Prostaglandin,PG）是重要的炎症介质,目前发现其参与调控NK细胞的活性,但是否介导NK细胞对HSC的杀伤从而影响肝纤维化进程,目前尚不清楚。本课题旨在阐明PG受体对NK细胞活性的影响,及其在肝纤维中的作用,为肝纤维化的治疗提供潜在的靶点。研究内容与方法:1.通过RT-PCR检测NK细胞PG受体表达情况,使用细胞因子刺激活化,并使用浓度梯度的PG受体抑制剂对NK细胞进行处理,检测IFN-γ表达,观察抑制PG受体对NK细胞活性的影响。2.通过与HSC共培养,检测NK细胞裂解HSC情况,研究PG受体抑制剂对NK细胞杀伤HSC功能的影响。3.通过细胞流式术分析NK细胞四个不同阶段亚群比例的变化,研究基因敲除PG受体对NK发育的影响。4.使用四氯化碳（CCL4）造肝脏纤维化模型,并通过Western blot,HE染色,天狼星红染色评价肝纤维化的程度。5.通过培养板抗体包被技术激活NK细胞,以及体外NK细胞和与肝脏星状细胞共培养,检测IFN-γ表达,观察基因敲除PG受体对NK细胞活性的影响。6.使用细胞流式分选,尾静脉注射方法,在肝纤维模型中回输NK细胞亚群通过Western blot,HE染色,天狼星红染色评价肝纤维化逆转的程度。研究结果:1.人NK细胞系NK-92MI表达高表达前列腺素受体EP2、EP3、EP4、DP1受体,在细胞因子的活化下,EP4和DP1抑制剂提高NK细胞活性,而EP3抑制剂明显降低其活性,并成剂量依赖性。在小鼠原代NK细胞上,TP,EP2,EP3,EP4,DP1,DP2都有表达,同样,EP4和DP1抑制剂提高NK细胞活性,而EP3抑制剂明显降低其活性,并成剂量依赖性。2.EP3抑制剂明显抑制NK细胞对HSC的杀伤作用。EP3^-/-小鼠原代NK细胞对HSC的杀伤作用明显减弱。3.EP3^-/-小鼠脾脏iNK比例增多,mNK比例减少,处于第三阶段的CD27+CD11b+亚群（DP）比例明显减少。同样,肝脏NK细胞CD27+CD11b+亚群比例呈一致性变化。4.在四氯化碳诱导的肝纤维化过程中,EP3^-/-小鼠脾脏总的NK细胞比例升高,iNK比例增多,mNK比例减少,处于第三阶段的CD27⁺CD11b⁺亚群（DP）比例明显减少。同样,EP3^-/-小鼠肝脏NK细胞CD27⁺CD11b⁺亚群比例呈一致性变化。5.在四氯化碳诱导的肝纤维化模型中,EP3^-/-小鼠肝脏损伤加重,胶原III表达明显上升,星状细胞活化指标α-SMA明显上升,纤维化更加严重。6.在四氯化碳诱导的肝纤维化过程中,EP3^-/-小鼠肝脏的NK细胞CD27⁺CD11b⁺亚群在NK1.1抗体包被刺激下分泌IFN-γ的能力明显下降。同样,体外与成熟的HSC共培养,EP3^-/-的NK细胞CD27⁺CD11b⁺亚群分泌IFN-γ的能力明显下降。7.在四氯化碳诱导的肝纤维化过程中,回输NK细胞CD27⁺CD11b⁺亚群明显降低胶原III表达,星状细胞活化指标α-SMA,改善EP3敲除小鼠的肝纤维化。研究结论:1.敲除EP3受体抑制NK细胞CD27⁺CD11b⁺亚群的功能。2.NK细胞CD27⁺CD11b⁺亚群是肝纤维化中杀伤活化HSC的主要细胞亚群。3.敲除EP3受体抑制NK细胞CD27⁺CD11b⁺亚群杀伤HSC的能力,从而促进肝纤维化进程。