论文部分内容阅读
猪瘟(Swine Fever, SF)是危害我国养猪业的恶传染病。近几年,由于养殖管理模式的变化,猪肉产品的流通,导致了猪瘟的流行情况更为复杂。利用分子生物学技术可以快捷迅速地应对猪瘟的急检任务,同时可以对流行毒株的基因序列进行分析,了解猪瘟流行毒株的变异情况。E0蛋白是猪瘟病毒重要的囊膜糖蛋白之一,改变或缺失E0上His297、His346 ,2个位置上的组氨酸会导致猪瘟病毒毒力减弱,甚至病毒复制受阻,表明E0与CSFV致病力有关。所以本研究根据GenBank上发表的CSFV Shimen株基因序列选择保守区域合成了2对引物E0DF/E0DR E0EF/E0ER,采用套式PCR扩增E0全基因,对我国10个省、自治区送检的病料进行了检测并开展了对猪瘟E0基因分子流行病学调查。结果如下:1.本研究由GenBank上发表的CSFV Shimen株基因序列,合成了2对引物E0DF/E0DR和E0EF/E0ER,并对这两对引物的特异性和灵敏度进行检测。用套式PCR方法对10个省、自治区送检的淋巴结、脾脏和扁桃体材料进行检测,结果证明这两对引物适用于猪瘟病毒的检测工作。2.本研究使用套式PCR检测方法,对我国10个省、自治区送检的1600多份样本进行检测。结果统计,猪瘟阳性检出率2005年间约为26%,2006年间为39%。3.各省区的猪瘟流行毒株间E0基因的核酸变异在0.0%~18.0%之间,猪瘟流行毒株与参考毒株HCLV间的核酸变异在1.0%~17%之间;各省区猪瘟流行毒株间E0片段的氨基酸变异在0.0%~19.0%之间,猪瘟流行毒株与参考毒株HCLV间氨基酸变异在0.4%~18%之间。CSFV流行毒株中,HEN74、LN163、HEB30、AH44ZJ87、ZJ47、ZJ94、ZJ69、HUN84、SD89、AH76、ZJ73、FJ216、AH24与我国的主要参考毒株Shimen、HCLV、CHVRI毒株属于基因1群,其余毒株都属于基因2群,说明我国大部分省区以基因2群猪瘟毒株为优势流行毒株。对HCLV毒株的氨基酸基序进行比较99株猪瘟流行毒株在28-36位和75-82中有11株猪瘟流行毒株发生变异,而RNase的催化活性关键氨基酸残基高度保守。本研究使用套式PCR检测方法,对我国10个省、自治区猪群猪瘟感染情况进行了检测调查,获得了珍贵的猪瘟流行病学资料,为我国猪瘟的防治及流行病学研究奠定基础。