【摘 要】
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在无脊椎动物中, Innexin (Inx)蛋白可以在无脊椎动物的细胞膜上组成hemichannels (半通道)或是在相邻细胞间形成gap junctions (GJ,间隙连接)。前期的研究显示,Inx蛋白可能
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在无脊椎动物中, Innexin (Inx)蛋白可以在无脊椎动物的细胞膜上组成hemichannels (半通道)或是在相邻细胞间形成gap junctions (GJ,间隙连接)。前期的研究显示,Inx蛋白可能存在多重功能。此外据相关文献报道,HeLa,HCT116等人体癌细胞中多种connexin基因缺失,可能造成细胞间隙和连接结构功能的异常。以此为背景,我们为了进一步证实Inx蛋白参与构建了有功能活性的hemichannel和gap junction,且与细胞粘附和凋亡有关,开展了SpliInx2和SpliInx3蛋白在293T、 HCT116和HaLa三种哺乳动物细胞中异源表达的研究,以探讨Inx2和Inx3蛋白的相关功能。本研究成功构建了斜纹夜蛾Splilnx2和Splilnx3基因的真核表达载体p3×FLAG-CMV-SpliInx2和p3xFLAG-CMV-Splilnx3以及阳性对照EGFP基因的表达载体p3xFLAG-CMV-EGFP,并转染至293T、HCT116和HeLa田胞中。通过荧光倒置显微镜观察和Western blot实验的检测证明FLAG-EGFP基因在293T、HCT116和HeLa细胞中进行了表达并有蛋白的修饰反应;此外Splilnx2、 Splilnx3基因在转染72小时后观察到有HeLa细胞凋亡现象。之后利用融合蛋白标签FLAG抗体进行Western blot检测,结果表明SpliInx2和Splilnx3蛋白在293T细胞中均有表达,只有Splilnx2蛋白在HCT116细胞中有表达,而在HeLa细胞中,Splilnx2和Splilnx3蛋白均没有表达。且初步发现细胞的凋亡与PI3K/Akt信号通路的未激活和Bid蛋白的截短有关,并在这个通路中激活了Caspase3蛋白。
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