前言 幼稚性及表型不成熟的脐血造血细胞和免疫细胞，降低了脐血移植(CBT)的移植物抗白血病(graft versus leukemia，GVL)效应，增加了脐血移植复发几率。采用同供者淋巴细胞输注(Donor Lymphocyte Infusion，DLI)可治疗脐血移植后的肿瘤复发，但由于存在较高的移植物抗宿主病(GVHD)发生率、高死亡率限制了它的应用范围。为增加脐血移植(CBT)的成功率及降低疾病复发率可采用混合脐血移植，但混合脐血移植可能会增强移植物抗宿主病(GVHD)的发生程度和发生率。本研究观察了不同剂量电离辐射对脐血淋巴细胞增殖活性和NK细胞体外抗肿瘤活性的影响，以初步探讨电离辐射在脐血移植中的临床应用价值。 实验材料与方法 一、材料 K526细胞：辽宁省肿瘤研究所 ~3H-TdR：购自中国原子能研究院 刀豆蛋白A(ConA)购自美国Sigma公司 脐血采自中国医大二院、空军463医院 Varian 6MV X线直线加速器，来自辽宁省肿瘤医院 二、方法 无菌条件下穿刺脐静脉采集37-42周龄足月正常分娩的新生儿脐带血，体外肝素抗凝(20IU/ml)。采血6小时内应用常规密度梯度离心法分离脐血单个核细胞(MNC)，RPMI1640培养液（Hyclone）洗涤2次，最后加入含10％胎牛血清的 RPMI1640培养液，计数并调整细胞浓度。 （1）脐血淋巴细胞增殖的测量 取已分离的单个核细胞，调至细胞浓度二X10Vml，以10P牙Inl刀豆蛋白 A（Con A）刺激增殖，37T，5％CO卜饱和湿度条件下培养24 ／J’时。接受不同剂量N．25 Gy，0．5 Gy，IGy，2 Gy，4 Gy，6Gy，8 Gy，16Gy以射线照射。照射后立即置于 96孔培养板，取 4个平行样本，每孔加1皿…，继续培养56小时后加h－＊dRO卜＊y孔）再培养8小时后用多头细胞收集器收集细胞，置于49型玻璃纤维膜上，静置过夜，将干燥的滤纸加人液烁瓶中，用Beckman液体闪烁计数器计数放射性核素每分钟闪烁数＊PM值人淋巴细胞的增殖反应用刺激指数瞩I）评价，SI＝实验孔CPM均血对照TLCPM均值，通常SI＞2即有意义。 ＊）脐血NK纲胞活性的测量 ①取传代培养48小时的K562细胞为靶细胞，台盼蓝拒染试验测定细胞活力，应达到 98％以上。调整浓度 IX 106／nd，加人V－TdRO 乃7T，5％COh饱和湿度条件下培养，孵育 6 ／J’时，洗涤 2次去除游离的’H－TdR，再制备成 5 X 105／d细胞悬液备用。 ②脐血单个核细胞洗涤2次后，调整纲胞浓度为 IX 10Vrnl作为效应细胞（效靶比20：U，予以上述不同剂量X射线照射。将效应细胞与制备好的靶细胞每孔各加 100gi置于 96孔培养板，设4个平行样。同时设靶细胞对照组。于37 t，5％CO”饱和湿度条件下继续培养18小时后收集细胞，置于49型玻璃纤维膜上，静置过夜，将干燥的滤纸加人液闪瓶中，用Becklnan液体闪烁计数器计数放射性核素CPM值。 ·2· 实验结果 0．25叶 Gy剂量范围X射线照射抑制淋巴细胞增殖活性，抑制程度与辐照剂量呈正相关卜＝0．839，P＜O．仍L其中4叶6呵射线照射未发现其明显的增殖活性；0．25－2 GyX射线可引起脐血NK细胞活性的显著增高，4GyX射线保持NK细胞活性，6－16GyX射线可引起脐血 NK细胞活性显著性降低。 讨 论 提高移植物抗白血病GVL效应、降低疾病复发率是目前脐血移植研究的重要目标。如何控制脐血移植后供者淋巴细胞输注和混合脐血移植的移植物抗宿主病（GVHD）也是急待解决的一个问题。张立成等认为 7．SGyX射线照射供者淋巴细胞后输注能减轻移植物抗宿主病（GVHD）发生的同时保留抗白血病作用。Waller等报道了异体骨髓移植复发的患者接受7．SGy照射的供者淋巴细胞输注，疗效满意，移植物抗宿主病（GVHD）发生亦明显降低。小于3岁婴幼儿的淋巴细胞功能相对幼稚，表现出对辐射更强的敏感性，其增殖活性也与脐血相似。 本研究表明：应用 4Gyx射线照射完全抑制脐血淋巴细胞增殖的同时仍保持NK细胞抗肿瘤活性。因此，在进行供者淋巴细胞输注或混合脐血移植时，4GyX射线照射脐血细胞，再进行过继性细胞兔疫治疗可降低移植物抗宿主病做发生同时保持移植物抗白血病效应。脐血移植复发的患者接受 4Gy照射的供者淋巴细胞输注，可以减轻移植物抗宿主病（GVHD）的发生程度，降低发生率，同时不降低移植物抗白血病GVL效应。 ·3· 结 论 4GyX射线照射完全抑制脐血淋巴细胞的增殖的同时仍呈现脐血NK细胞抗肿瘤活性。因此，在进行供者淋巴细胞输注或混合脐血移植时，应用4GyX射线照射脐血细胞，再进行过继性细胞免疫治疗可能降低移植物抗宿主病效应，同时不影响移植物抗白血病效应。