酯酶（Esterase）是一种水解酶类，又称羧酸酯酶，可催化酯水解、酯交换、酯合成、多肽及内酯合成等众多反应，广泛应用于食品、医药及环保等领域。微生物酯酶作为重要的工业酶，具有反应条件温和、催化活性高、选择性强、产物易于分离等优点，并且微生物种类繁多、发酵周期短、产品生物相容性好、可大规模培养，利用微生物发酵制备酯酶，更能满足工业化的需求。本文对产酯酶菌株的筛选、菌种鉴定、发酵条件优化、诱导剂吐温80对产酶的影响、酯酶的酶学特性等方面做了比较全面的研究。　　从被原油污染的土壤和水体中收集样品，利用三丁酸甘油酯平板进行初筛，再经过摇瓶发酵进行复筛，最终确定编号为“B1”的酯酶高产菌株为实验菌株，并对其进行形态结构、生理生化特征等常规分类鉴定，以及16S rDNA分子分类学鉴定，确定该菌株属于不动杆菌属，命名为Acinetobacter sp. B1。　　为提高菌株B1的产酶水平，采用单因素试验、Plackett-Burman法和中心组合法进行产酶发酵工艺的优化。最优发酵工艺为：可溶性淀粉2.5%、胰蛋白胨1.5%、K2HPO40.25%、吐温800.66%、初始pH7.5、种龄24 h、接种量1%、装液量50 mL/250 mL。菌株B1在上述培养条件下发酵培养36 h后，酶活达到152.13 U/mL，比未优化前提高近10倍。　　针对吐温80明显提高菌株B1产酶的机理进行了系列实验，研究发现在本实验中吐温80既可以充当碳源，也可以作为一种营养因子促进实验菌株的生长及酯酶的产生；吐温80的加入还影响细菌细胞膜脂肪酸的组成，使膜中的油酸（C18:1）比例由3.04%增至32.07%，饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸的比率也由0.17增至1.5，从而增大膜的通透性；促进总蛋白和酯酶的分泌，低浓度吐温80（0.5%）的加入使菌株B1的比酶活比对照的提高2.3倍；此外，低浓度吐温80与酯酶短时间接触时，就可以显著地提高酯酶酶活。　　菌株B1所产的酯酶在30-65℃的相对酶活均在60%以上，温度适应范围较广，其最适反应温度为45℃；最适反应pH值为8.8；K+、Ca2+、Mg2+对该酶有促进作用，其中Ca2+对酶的激活作用最显著；Zn2+和Cu2+强烈抑制该酶的酶活；阴离子表面活性剂SDS也强烈抑制该酶活性，低浓度的CTAB、TritonX-100和吐温80提高该酶的酶活；该酯酶对甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、正己烷、丙酮、苯这几种常见有机溶剂有较好的耐受性，温育处理48 h后残余酶活仍在60%以上。