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结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是国内外最常见的癌症之一,5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil,5-Fu）作为CRC一线治疗中的主要化疗药物之一,存在体内分布缺乏特异性和诱导耐药的缺点,使得其疗效和安全性并不理想。5-Fu诱导耐药的机制为诱导肿瘤细胞发生自噬,因此,采用自噬抑制剂从理论上可克服5-Fu耐药,从而提高疗效。课题组前期自主合成了自噬抑制剂羟氯喹（Hydroxychloroquine,HCQ）的前体药物羟氯喹亚麻酸酯（Acid ester of hydroxychloroquine and linolenic acid,AHQ）,提高了肿瘤细胞对药物的摄取,AHQ对CRC细胞（HT-29）表现出最佳的天然靶向性,同时,AHQ与5-Fu联用的体内外研究结果表现出协同抗CRC效果。但AHQ水溶性较差,半衰期（t1/2）短,无法实现抗肿瘤长效治疗。以癌细胞膜（Cancer cell membrane,CCM）为基础的仿生纳米系统显示出强大的肿瘤归巢靶向能力及良好的生物相容性,脂质体（Liposomes,LPs）可以改善疏水性药物的水溶性,从而提高抗肿瘤疗效和安全性。本研究将AHQ负载于CCM与LPs融合形成的仿生型纳米递药系统（CCM-AHQ-LPs）中,改善AHQ的溶解性,延长其循环作用时间,实现肿瘤细胞内靶向递送药物与最佳抗肿瘤活性。实验方法:1.基于高效液相色谱技术建立AHQ含量测定方法。采用薄膜水化法制备AHQ-LPs,通过单因素考察筛选出最优制备工艺,并对AHQ-LPs进行制剂学系统评价。2.采用试剂盒提取HT-29细胞膜,通过BCA、SDS-PAGE定量CCM蛋白浓度及完整性。3.通过超声法将CCM包覆在AHQ-LPs上以制备CCM-AHQ-LPs,并对其进行制剂学系统评价。4.采用香豆素6对LPs进行荧光标记,利用激光共聚焦扫描显微镜（Confocal laser scanning microscope,CLSM）考察CCM与LPs的共定位,HT-29细胞对CCMLPs的摄取、内吞机制及CCM-LPs的溶酶体逃逸能力。5.采用CCK-8法考察CCM-LPs的安全性以及5-Fu分别联合AHQ、AHQLPs、CCM-AHQ-LPs对HT-29细胞活性的影响。6.通过平板克隆、划痕实验考察5-Fu分别联合AHQ、AHQ-LPs、CCM-AHQLPs对HT-29细胞增殖和迁移的影响。7.通过流式细胞术考察5-Fu分别联合AHQ、AHQ-LPs、CCM-AHQ-LPs对HT-29细胞周期和凋亡的影响。8.利用荧光探针DCFH-DA检测5-Fu分别联合AHQ、AHQ-LPs、CCM-AHQLPs对HT-29细胞产生活性氧水平的影响。实验结果:1.成功制备得到AHQ-LPs（粒径:108.47±0.42nm、Zeta电位:21.2±2.04 m V、AHQ包封率:80.42±1.01%）和CCM-AHQ-LPs（粒径:124.97±7.88nm、Zeta电位:-21.97±0.21m V、AHQ包封率:87.55±1.58%）。AHQ-LPs和CCM-AHQ-LPs显示出良好的体外释放特性。AHQ-LPs和CCM-AHQ-LPs在5天内的存放稳定性良好。体外溶血实验显示AHQ-LPs和CCM-AHQ-LPs均不会引起红细胞溶血。2.CCM完整性实验结果显示CCM和CCM-LPs能保留HT-29细胞上的大部分蛋白,CCM与LPs共定位实验结果显示CCM在LPs上的成功包覆。3.CCK-8实验结果验证了CCM-LPs的生物安全性,在与5-Fu联合给药时,AHQ、AHQ-LPs和CCM-AHQ-LPs对HT-29细胞显示出剂量和时间依赖性的抑制活性,而CCM-AHQ-LPs对HT-29细胞显示出最强的抑制作用。4.细胞摄取结果显示与HCT116和MCF-7细胞相比,HT-29细胞对HT-29来源的CCM-LPs表现出最高的摄取水平。LPs及CCM-LPs均通过细胞膜穴样介导的内吞作用进入细胞。CCM-LPs具有溶酶体逃逸能力。5.平板克隆、划痕实验结果显示,5-Fu与CCM-AHQ-LPs联用组对HT-29细胞的增殖、迁移能力表现出最佳抑制作用。6.5-Fu分别与AHQ-LPs和CCM-AHQ-LPs联用时均会引起HT-29细胞G0/G1期及S期阻滞,而游离药物组（5-Fu+AHQ）会引起HT-29细胞G0/G1期阻滞。5-Fu与AHQ联用会诱导HT-29细胞晚期凋亡率提高。7.氧化应激结果显示,与游离药物组（5-Fu+AHQ）相比,5-Fu与CCM-AHQLPs联用组促进HT-29细胞产生活性氧水平的能力最强。实验结论:本实验成功构建了具有良好制剂学特性和肿瘤归巢靶向性的CCM-AHQ-LPs,与5-Fu联用,表现出最佳的抗CRC活性。